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我个人觉得全骨髓法很实用，而且我不离心，直接把骨髓悬液冲到培养瓶中，效果很好。以下是我的方案, \; P! a( x) R8 H D
原代培养步骤# q9 B" `' l' N5 n) K6 }
1. 小鼠（3周龄）在水合氯醛下麻醉后处死，取双侧股骨、胫骨（保证骨头两端完好，去净肌肉组织），将完整的股骨放入含1%双抗的PBS中，将装有骨头的50ml离心管（一管30ml能装4、5根）放在泡沫箱（有冰袋）运输。' P. E( T4 N, Z
2.消台20分钟，准备T25培养瓶，60mm培养皿，原代器械盒（外科手术剪，镊子，血管钳，15ml注射器）1 h! D) P2 Z2 [* Q
3. 先将股骨浸泡在75%酒精3min，取出后PBS冲洗3遍（完全去除酒精），血管钳夹持股骨，手术剪剪去股骨两端骨骺，用5ml注射器抽取全培穿刺冲洗（一根骨头一只注射器），直接冲入tT25培养瓶（2ml培养基）（DMEM/F12+10%胎牛血清+1%双抗）。) K% C! v+ @$ V! C
4. 48h后全量换液（期间不要剧烈摇晃培养瓶）
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发表于 2018-9-20 12:03
