讨论

火云豹

在培养肿瘤干细胞的时候  培养基中要加入胰岛素 大家都是怎么溶解的呢

ambassador

1 X1 Q. @3 _9 o6 m
9 B% S. ~$ C  h; f! h) N$ z% X& O3 h你是说加胰酶吧！
2 ^4 M% Y" I+ a! {" ^我们以前养海拉细胞的时候，大概是这样的流程：2 r4 M% E9 g$ F" E4 J/ x
1.胰酶和EDTA(按一定比例，我忘了具体多少...)称好以后，
: V' L# m8 i6 K& [3 a2 t0 y: {3 t2.用双蒸水溶解，
! e4 j; s0 [2 B7 ]" }0 `3.电磁搅拌仪搅匀，& }2 W1 [2 I5 h7 U5 S4 B
4.再微孔滤膜过滤

daviddow

你看看sigma那里有说明，胰岛素是怎么溶解的。那里有个单子，是说各种物质的溶解方法。我就不给你找了。要是你找不到，就联系我

火云豹

呵呵 我这里每次来的sigma的产品都没有附带说明书 很麻烦

chuanbaozang

用1ml的酸化水溶解10mg胰岛素，溶解过滤分装，使用终浓度为10ug/ml。
, J4 k% {2 K) A7 `3 y4 {酸化水是100ml中加1ml左右冰醋酸，调节pH为1.9左右，高压灭菌，冷却即可。3 V$ b1 U8 ^) `  A& q7 x
如果在超净台中打开sigma的胰岛素原装，我个人认为可以不过滤灭菌的。
" ]& o9 A- o" \' O以上仅供参考。

angel-sakura

回复 2# ambassador 6 y( P2 }8 L( N! i) j% d' v+ E7 Y
用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。

ambassador

回复  ambassador
9 q$ k7 P, ~- X+ {用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。
& N. S; E6 m8 rangel-sakura 发表于 2010-5-25 12:31

, J- T, l) F# P. y+ j+ F
1 y, }; T% ?) G* ~$ `8 {  r
) I+ }! R) x# R$ `9 t' d$ N! M
    可能我们那时没买PBS，是用胰酶与EDTA按一定比例来调节渗透压的。

haijunlv2004

1ml冰乙酸加到100ml双蒸水里制成酸化水，100 mg Insulin 用27ml 酸化水溶解，浓度约为100U/ml，过滤除菌，分装成1ml/EP管，-20℃保存。& K: w! O, j& [$ |. w
用时先将1ml的储存液溶于5ml Hepes 中，再加入到500ml 培养基，终浓度约为0.2U/ml。
0 t8 A7 U1 k3 Q! j5 Q切勿直接将1ml储存液加入500ml培养基，会导致无法溶解。

火云豹

大家各抒己见 结合现有情况实践中