讨论

火云豹

在培养肿瘤干细胞的时候  培养基中要加入胰岛素 大家都是怎么溶解的呢

ambassador

: H9 ^" C; ~. y+ l( o& m4 n7 e  b* }1 ^, f' f5 H
你是说加胰酶吧！2 u% O0 p; H) K( i8 x  d0 E
我们以前养海拉细胞的时候，大概是这样的流程：$ y% F8 F3 S, o6 i5 _' f- m
1.胰酶和EDTA(按一定比例，我忘了具体多少...)称好以后，6 d- g% N+ Y& @+ N$ e
2.用双蒸水溶解，
9 A( q+ `' _, V3.电磁搅拌仪搅匀，
7 U* W8 w/ P. G0 r* N4.再微孔滤膜过滤

daviddow

你看看sigma那里有说明，胰岛素是怎么溶解的。那里有个单子，是说各种物质的溶解方法。我就不给你找了。要是你找不到，就联系我

火云豹

呵呵 我这里每次来的sigma的产品都没有附带说明书 很麻烦

chuanbaozang

用1ml的酸化水溶解10mg胰岛素，溶解过滤分装，使用终浓度为10ug/ml。& ]0 j) {# M, k. ^" r; C3 @+ g; |; }
酸化水是100ml中加1ml左右冰醋酸，调节pH为1.9左右，高压灭菌，冷却即可。7 G+ _0 `" {6 u- v- q  H
如果在超净台中打开sigma的胰岛素原装，我个人认为可以不过滤灭菌的。
2 p# |0 y( b! m' H: y; D' Q0 `5 D以上仅供参考。

angel-sakura

回复 2# ambassador 4 J) o9 M6 E! E7 I9 s
用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。

ambassador

回复  ambassador
5 w+ @3 {' ]5 h9 W8 @1 x6 D用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。
* d. x5 g0 E# q3 e0 Q2 \angel-sakura 发表于 2010-5-25 12:31

0 u; C/ s+ X% Q

! @9 @$ ]4 @% L' s( E
3 x) M& l: f* g& N0 ]$ X' q    可能我们那时没买PBS，是用胰酶与EDTA按一定比例来调节渗透压的。

haijunlv2004

1ml冰乙酸加到100ml双蒸水里制成酸化水，100 mg Insulin 用27ml 酸化水溶解，浓度约为100U/ml，过滤除菌，分装成1ml/EP管，-20℃保存。
9 Q+ C- C# s4 Z% ?) S用时先将1ml的储存液溶于5ml Hepes 中，再加入到500ml 培养基，终浓度约为0.2U/ml。: w/ }* N# H! ~7 k: X, z) d
切勿直接将1ml储存液加入500ml培养基，会导致无法溶解。

火云豹

大家各抒己见 结合现有情况实践中