细胞最近不生长请大虾们给指教一下！

sxjcsq2010

我现在培养的羊膜间充质干细胞，采用二步酶消化法，培养基用的DF12，10%FBS，20ug/ml bFGF,10ng/ml L-G 在三四月份的时候还培养出来一批，一直能传到十几代，可是近来再做样，细胞基本不长，并且在第一天做样完毕后，第二天有一部分细胞帖壁，但是明显细胞呈现老化状态，半量换液后，第三天往后，细胞就开始哗哗的见上帝了。不知道问题出在什么地方，请大虾们给指教一下！

痞子的烟头

我没有培养过YANG的间充质干细胞，但我认为可能的原因有，培养基中加的因子是否时间过久，2.细胞生长抑制，收集之前生长状态好的细胞时的培养基，按一比一混合来培养你现在的细胞，

sxjcsq2010

我们实验室人多，因子用的一直都是新的；不太可能是细胞抑制吧，细胞抑制貌似是细胞接触抑制吧，可是细胞密度较小，只能达到50%左右。

dingyx2009

排除一切可能的原因。如果操作几次都是这样，操作方法没有问题。你想一下是不是因子的问题，换了批号或其它的试剂。我就出现和你同样的问题，三四月份养的很好，实验做一半，又买了新的细胞因子，结果也是养不起来。最后发现是因子的问题，在退货的过程中，他们自己说因为世博会，曲折周转保存的干冰可能出了问题。反正你要从各个能想到的环节来查找。

sxjcsq2010

上帝啊，我今天又做样了，……问题在哪里？……希望它明天能开开心的长进来吧！

圣牛

如果确信操作没问题的话.可能是细胞因子问题." Q, S+ O9 P! u" [+ D* G
一般细胞因子因子建议在数月内用完.(3-5月),且期间切忌反复冻存复苏!
& ]% V4 @, X$ g0 [4 N# I你是否用得是数月前定的细胞因子.若是的话说不定是由于细胞因子过期了.8 Y( z; Q* H8 M$ f: \# J0 E0 [
若是新定的细胞因子.那就试试其他厂家的.  祝你好运!

sxjcsq2010

回复 6# 圣牛 # `: o8 n9 f! q. x3 n6 R
噢，谢谢你！细胞因子是新的，没有过期。近来又做一批样，效果还行。可能是天气渐热，酶在室温消化的时间不像冬天那样时间长了。