请教关于分化诱导培养基培养的问题～

wangzhuo822001

请问一下，小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的分化诱导培养基培养里面的成分有讲究么？我看对分化因子加与不加，加什么分化因子都有人做啊～～有标准的分化诱导培养基么？

xjya

含20%FCS的IMDM,  100 U/ml penicillin,100 _g/ml streptomycin, 1% nonessential amino acids (all purchased from Invitrogen), 0.1 mM _-mercaptoethanol

wangzhuo822001

回复 2# xjya $ ~3 y  K5 ]0 J" a- s
6 P) F  ?! i) o* b0 n7 W& W. h, t* a
你使用的培养基就没有加分化因子噢～！～

xjya

回复 3# wangzhuo822001 6 j6 g% j4 k' K3 |- O
是啊,这是标准的分化培养基,这种条件下小鼠的ES细胞或小鼠的iPS细胞都是可以自动分化的,分化第9天可见跳动区域(心肌细胞).
; }& b3 e; o9 [; ^% r. U    根据不同的实验需要,可以加不同的因子诱导定向分化.

上海过客

8 K& J( M! `" M% x/ `: o; k

回复  wangzhuo822001 " y2 \; {. n1 N9 s3 V5 I
是啊,这是标准的分化培养基,这种条件下小鼠的ES细胞或小鼠的iPS细胞都是可以自动分 ...
# N2 f* I( V' p; Z. |7 g9 Nxjya 发表于 2010-6-19 13:34

$ ]4 _1 s  _8 g! t# \! j: x# s
* M( L( S0 y9 t/ E* P
8 V2 l/ R' C+ d" T) r% q
版主 ，我用的是  DMEM。15% FBS，NEAA， 丙酮酸钠，β-巯基乙醇， 谷氨酰胺 的 配方不知道  可不可以 ？
0 V  m: ]0 ?( U7 ?- W1 x" J* X7 j4 r' M$ b4 x9 s5 [; t2 T
) i1 T& v# f2 o% t$ C
做了 三次 成功了  一次 ，不过这一次  24孔 都有跳动细胞 。0 d9 R8 W  O# C% R+ w1 S7 m
8 ?5 w. G: a4 t* \; Q
   另外 的 细胞 ，感觉  EB 中央隆起的 地方 都 破了 ，不知道 是什么原因呢 ？

xjya

回复 5# 上海过客 , v. _' t, k  }/ L  ~
- S5 c3 E* z4 B4 J0 D0 ?
# j4 t& V! b& V( K3 L' c6 u
    具体看你的细胞系,我说的配方对mES细胞的D3 系,R1系,CGR8 ,miPS（Jaenish）都适用。分化一般都用IMDM，20%FCS，不然后期营养不够。你说的空泡可能就是分化后期营养跟不上导致的，你可以观察一下是不是有很多死细胞漂浮。

上海过客

谢谢 ，等时间我 把  拟胚体和  克隆的照片发上来 。大家看看