关于细胞铺板的小问题

hljzyydx

小弟以前没有铺过48孔板，这几天才开始，铺板后发现细胞有很多聚集在中间部分，相互层叠，已经反复敲打板子数次，散开效果仍不明显，不知道为什么，以前铺别的板子的时候没发现有这问题，所以想请各位朋友帮忙分析一下，提点建议。。/ Q5 f( o( J0 O6 _, n; x( W) e

) N- m' `3 P7 |5 @: `十分感谢

hljzyydx

不好意思，打错了，是24孔板

xujie158

可以按下面这样做试试吧：  Q. u9 H. `' k1 w+ N) F. a& T
1.加样的时候你的细胞浓度低一些，这样加样时就会体积多一些，我们之前做都是24孔板，每孔加1ml，不要先加细胞悬液再补充培养基，这样就比较容易匀了；$ Y& n4 @$ x* T( l3 Q
2.加完样轻拍你的板子侧面。旋转着多拍拍，一般都可以比较均匀的。+ g3 q$ B$ o" Y  s; i! q
最后我感觉就是本来板子中间和边缘力的作用就不一致，可能就会导致你铺的细胞有些不匀！这最后一条没验证过啊！呵呵。

hljzyydx

回复 3# xujie158
5 R8 m; v1 c: g% n( P2 n/ @
3 Q3 G+ f# u  ^3 ^, L  w
9 B0 `- i# D; U3 Y! x) W    呵呵，我试试看，谢谢！

cony

尽量吹打均匀细胞，加样时一滴滴均匀滴在24-well板上。

小鲁鲁

小弟感觉最好是把细胞浓度调整好了再加入24孔板中，不要在24孔中调整细胞浓度，比如补加之类的。还有就是加完了以后在移动到超净台外面观察的时候会影响细胞的分布，如果对于自己的操作有信心，可以不观察，待细胞贴壁一段时间以后再观察。这个是小弟自己的感觉，如有谬误，请指教。

懵懂干细胞

加细胞悬液的时候尽量避免都滴加在中间，加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。

hljzyydx

回复 6# 小鲁鲁
1 O5 A& K# \/ h5 K5 d# H3 c9 f5 x' Z; ^3 y
7 y6 {+ y& O8 M+ K! R6 |% f+ j6 C
    谢谢，我可以尝试一下，但是对自己的实力还是怀疑啊，呵呵！

hljzyydx

回复 7# 懵懂干细胞
. S: U0 e2 |7 H
6 R, ?+ I- A3 r1 M* {
& O) T+ w! ]) ]9 C5 E1 {- G    其实我加液体的时候一直没有加到中间，但是静下观察的时候就发现聚集现象，我甚至怀疑24板是不是中间有一点点凹陷啊

hljzyydx

回复 3# xujie158 9 L0 i+ Z- m- C1 k) u

5 Y3 E; ]; W9 X; U7 B
* S' @  ?1 F. P0 H( _2 _    麻烦问一下，你们先加悬液，后加培养液，是不是加完了培养液后要用枪混匀呢？谢谢