关于原代的消化问题

aristolal23

小弟最近做实验发现原代的SD大鼠BMSC很难消化，所用的胰酶浓度是0.25%+EDTA的，细胞一般养5，6天后，是不是养的时间有点长呢？谢谢各位了

透明之蓝

原代的是比较难消化，但是，最好不要太长时间。因为原代细胞比较杂，除了MSC还有成纤维细胞等其他细胞，但是MSC是相对比较容易消化下来的，所以，为了获得较高的纯度，还是要有所取舍的！而且，消化时间过长对MSC也不好！

why121

我们实验室做大鼠的同学是用0.125的胰酶加0.01的EDTA在37°条件下消化1分半钟 能吹下来的细胞就要 下不来的就不要  结果纯度很好 你可以参考下 具体我也不太清楚 因为我还在为小鼠和脐带血MSC而烦恼着！

aristolal23

回复 2# 透明之蓝
" [* X3 K( t1 |8 b2 r
& r' U" f) K# i, \$ T) ~, t) a  F
    谢谢你的建议

aristolal23

我们实验室做大鼠的同学是用0.125的胰酶加0.01的EDTA在37°条件下消化1分半钟 能吹下来的细胞就要 下不来的 ...9 }- u! Z2 m" T  x) Q! Z$ `
why121 发表于 2010-8-10 21:05

1 K  M0 f& I* h" m1 ]* k- v

  e) P$ t1 B3 T7 @: s! Q" Z3 c4 i9 k
9 @3 R! r4 u9 [5 B7 U$ z    好的，下次采取你的建议试一试

mojai

原代细胞本来就难消化，建议用PBS液多洗两遍，我的经验：    T75,培养瓶ＰＢＳ液每次１０mｌ，洗三次，0.125%胰酶1ml，10秒钟就可以下来，用1mlＦＢＳ终止消化

sfk06

你可以用低浓度的胰酶进行预消化试试！在养Hpg-2时，因其难消化，我们就用0.1的胰酶预消化接着用高浓度的胰酶进行消化.效果不错！你可以试试。

illidancui

原代细胞本来就难消化，建议用PBS液多洗两遍，我的经验：    T75,培养瓶ＰＢＳ液每次１０mｌ，洗三次，0.12 ...
# z% s) u4 U! L2 X8 l1 Gmojai 发表于 2010-8-10 22:11

- j" D& E7 |' r. b2 Z9 f* e
/ M6 G( ]: @: Y9 Q# ]6 m7 }8 T1 {+ Q) ]) P7 g9 b0 E
    大鼠的这个细胞用0.25%E酶消化时间不是都说是要几分钟么，10s能消化下来么？
/ \. v- h( S0 @+ L1 t) c我在实验过程中基本都在1min以内消化完，纯度也还行。还有听说原代细胞比较容易消化么，困惑了，望高手解答，呵呵。

mojai

回复 8# illidancui - M: {' H, ?7 J; e( f  z$ L5 }
一般来说，原代细胞并不好消化，传代细胞不好的话，消化的时间会比较长
; p- u5 B% L0 Y只要培养瓶里残留的血清洗净了，就很容易消化了，我的细胞都是在很短的时间内消化好的

why121

我现在也感觉多浪费点PBS 洗的话 是要好下来些 但时间好像不能超过3分钟吧~