奇怪，神经干细胞消化后传代后细胞都消失了？（附图）

xfyang2007123

+ B4 u7 L3 y) I# s0 F  |6 W+ k: p8 A3 N, f8 ~+ T3 u+ L- E
回复 7# exin11
( X& B+ Y6 i; A7 l谢谢建议，很多方面确实容易出问题，就只能挨点找原因了。另外我们这里的离心机是较老的那种，500转每分一个档，所以调不到900啊。

jason

你的培养的神经球还是不错的，说明培养基没有问题。但因为是原代10天的细胞，神经干细胞比例还很少，神经球还很松散，是很容易吹散的。
! r4 e  Y' d. J如果传代两三代后，神经球就很紧实了，用普通的吹打很难将神经球吹散，所以要用酶消化。但千万不能用胰酶，胰酶消化会导致绝大部分细胞死亡，死亡的细胞释放的物质会导致其他活细胞都死掉的。换用sigma或invitrogen的accutase吧
& y; t, w- M' j  ?! U: z' M还有就是前几代培养是不要半量换液，全量换吧。因为这段时间很多非神经干细胞逐渐死亡，释放很多炎性因子等会诱导神经干细胞死亡。

sfk06

或许可能与离心有关，所剩细胞太少不足以维持细胞生存环境。疑惑是某个环节的突然变化。你操作过程中有没有出现和以前不一样的事情？？？

dulaiyouyu

回复 10# xfyang2007123 - U, `; H0 Q6 K' [- N
& K  r6 B: E; w  b7 \8 o  n

! r. M8 R. {- y; ?4 @    试试用木瓜蛋白酶吧。比胰酶温和多了。然后用PBS漂洗就可以了。

liyong7732

培养NSC比较费钱，你要用B27培养，或者N2，消化时候有sigma的复合酶，好像是蛋白酶+木瓜蛋白酶+？？酶， 忘了 ，你查找一下，这种酶消化温和！胰酶用的浓度太大，建议稀释到0.125或0.1% ，用血清中和后可以离心洗涤一次，不会影响太大，NSC本身在干细胞球中的含量就很低！祝成功

liyong7732

消化成小的神经球，不要消化成单细胞，长不起来

mumudan

换液时半量应该是怕神经球被吸掉，因为毕竟不是贴壁的细胞，但是传代没必要半量吸取吧，而且你传代消化十分钟貌似有点过了，控制在两到三分钟之内吧，用酶消化加上吹打时间还是不要太长为好，但是吹打最好用枪不要用吸管，而且用FBS如果离心后其实量是不多的应该不至于引起分化，应该不用担心，只是个人看法你可以改进看看。

xfyang2007123

回复 12# jason
# P( O$ W+ F& B% O2 ~谢谢指点。

xfyang2007123

回复 13# sfk06
, h$ X1 g/ |. {$ d1 o# x0 Y: M' z因为是原代培养首次传代，所以没有以前的经验，谢谢。

xfyang2007123

回复 14# dulaiyouyu
* l" Y' V+ T6 w哦，木瓜蛋白酶，不知道贵不贵，因为资金也有限，另外，请问您都是用这种酶消化的吗？效果怎么样？