奇怪，神经干细胞消化后传代后细胞都消失了？（附图）

guojingjing

回复 30# xfyang2007123
! t' D1 Z# m/ B" O1 c. n
( y5 e8 E& C2 V! d( s, n: @0 l
/ W  r. j9 V3 G4 L4 l    在1.5ml 离心管里加入200微升培养基，大概要吹打两三百下，不过建议可以用0.05%的胰酶短暂消化一下，再吹打就会容易一些

lhmxm

"边用吸管吹打，约十分钟"时间太长了，对细胞损害太大

lhmxm

"边用吸管吹打，约十分钟"时间太长了，对细胞损害太大

xfyang2007123

回复 33# lhmxm
; L; D& z: v) J/ O4 I3 [5 A估计是那样吧，呵呵，改进中！

jennyshy

我遇到过，问题就是消化过头了。; _, z3 h8 A" h# s( k: |* T1 N1 o

: G, j  C0 d* K) z原代细胞没有问题。传代的确要小心，胰酶也很难掌握消化的时间和使用浓度，个人认为如果在你加胰酶吹打时出现絮状的东西时就说明消化有点过了。我现在用siama的accutase，效果很好，一次也就用60微升左右。你不妨试试

xfyang2007123

回复 35# jennyshy : i7 l" j: D7 S5 p4 T& |

* H# w  N4 i- v5 F  OThank you!

qiuweiqin0618

回复 25# SVZ   h2 g* q( u6 Z: v1 V% ?1 i

% v( {3 B1 _2 a, X! H! j8 b/ L% ~
0 ^0 \# f8 J3 p( ]; [4 }+ V" {    赞同你的观点

tieyun

是鼠的神经干吗？建议改用0.05%胰酶加吹打消化，时间不要超过2分钟。可以用10%血清终止，再用培养液洗一次细胞团就好。

xfyang2007123

回复 38# tieyun . {0 w0 E8 n3 q# o7 d1 R9 [: ^! @
我用0.125%的胰酶消化加吹打也吹打不开呢，仍在一团。所以换了accutase试试。

dingyx2009

最关键的一点绝对不能在胰酶中吹打细胞的。只有细胞碎片就是这个原因。# B- ~* U1 B! `/ k1 h' M
我一般把含细胞的培养基取出，离心1000转5分钟，完全弃上清，加入胰酶加EDTA消化，孵箱孵育30分钟，每隔10分钟左右可取出震荡摇匀。10％的胎牛血清终止消化，1000r/5min,弃上清，培养基漂洗2次，再加入干细胞的培养基吹打15次左右，基本都是单细胞，分瓶培养。  u. Y( y* @5 c& s) N+ U# W
一直效果很好的。至于那一点残留的血清，根本达不到干细胞分化的程度。