奇怪，神经干细胞消化后传代后细胞都消失了？（附图）

xfyang2007123

回复 16# liyong7732
8 @$ \. ]$ v! U' V养这些东西确实比较费钱，太珍贵了，多谢祝福。我再摸摸条件吧。养了好几个月终于有点头绪了，但还很不成熟。

xfyang2007123

回复 17# mumudan
8 i+ p" x' J8 D5 B谢谢仁兄指点，要是能成功就太好了。

dulaiyouyu

回复 20# xfyang2007123
6 t" J0 a: m$ Y  k1 a2 R1 w6 H7 R0 b
% A. ?5 G0 t+ d, E* _% }
   恩，价格确实比TE要贵，有不少实验室用这个酶的。

懵懂干细胞

楼主你好，你用胰酶消化了10分钟还边吹打，你没终止消化就拿去离心，在离心的过程中也在消化啊，也就是相当于消化了15分钟，细胞受不了消化这么久吧？神经干细胞我不培养过，我一般消化就是2-5min。居然是悬浮细胞的话会不会不用胰酶消化也可以呢，直接离心加了培养液过后吹打分散分装好像就行的吧，像悬浮培养昆虫细胞SF9不用胰酶消化的。建议离心时间可以短一些，2-3min就可以，加陪液后可以再离心一遍再重新悬浮细胞（可以达到清洗遗留胰酶和减少细胞伤害的目的）。

SVZ

, @. j6 l' e5 y5 Z5 }! u

% E8 H: s" d) g5 N我做神经干细胞离心用的是1000rpm，3min，我把上清吸出拿到显微镜下看过，基本没什么细胞了。另外我使用的消化+机械吹打的方法。用invitrogen公司新上市的TrypLE消化液（说是胰酶替代液，作用较为温和些），消化5-10min，先在胰酶中将神经球基本吹打开后，再加入3倍TrypLE量的DMEM/12稀释，进一步吹打，约15-20次，不用加终止消化液（TrypLE说明书上说可以不加），离心，1000rpm，3min，培养液重悬细胞即可。! I6 B( o. v1 |: z+ p5 p
我养的细胞没有出现过你说的情况，但基本上是传到第3代就开始有一些神经球容易贴壁分化了。

xfyang2007123

回复 24# 懵懂干细胞 1 m, S' {; p7 G$ c) c7 L4 _
多谢指教。我仍旧要再取原代细胞，从头再来！

xfyang2007123

回复 25# SVZ
: `7 _" o- F& L3 N哦，太好了，请问您培养的也是大鼠胎鼠神经干细胞吗？以后常交流。

懵懂干细胞

祝你好运。

guojingjing

0.25%的胰酶对干细胞的损伤可能比较大，尤其是消化时间长达10min，一般的细胞消化液不需要那么长时间。可以尝试机械分散或者降低胰酶浓度

xfyang2007123

回复 29# guojingjing
# s: a3 [( R! i1 u/ N- V& I+ f谢谢帮助，因为是神经干细胞球，所以感觉很难消化。请问你们的机械分散法是用的普通吸管吹打吗？一般吹打多少次可以？谢谢。