急求神经干细胞诱导分化后死亡的原因

guojingjing

最近在做神经干细胞相关的实验，但是到分化这一部分就遇到瓶颈了。我的实验方法是使用P0小鼠的海马培养神经干细胞，培养基为DMEM/F12+B27+bFGF+EGF，细胞为悬浮培养的神经球。第三代细胞用于实验，分散为单细胞后种入PLL包被的24孔板，换分化培养基（DMEM/F12+B27+0.1%FBS），24h细胞伸出较长突起，48h后细胞突起更细，胞体变圆变小，96h后胞体基本呈碎片状，难以进行后续实验。
8 r' o  C+ x1 Z1 p: Z0 u     两年前做大鼠SVZ干细胞的时候用的同样的方法，细胞就可以到第7天后分化为3种细胞，但是现在细胞不到4天就死了，欲哭无泪，因为找不到原因。
5 P: I+ j8 h- h, V3 R' W& S; H     尝试过将细胞首先用增殖培养基使其贴别生长24h后再换分化培养基，或者用10%的FBS，都没有用。4 W- h6 P3 I# Z7 a" h  g% V
     恳请高手指教！急！！！！！

junjunxu

guojingjing ; 是否可以通过QQ交流神经干细胞培养心得，我也在培养：QQ652537630

ouyangjuan

你的培养基为什么要加B27啊？? 这些通常不是养已分化的神经类细胞才加入吗？

jennyshy

我做分化时也遇到这种问题，后来就直接在分化4d就做实验了。; z8 L+ b4 _1 @- S
0 l5 B9 }, M% S9 S
不知道诱导3、4d换液结果如何，正在尝试

guojingjing

回复 4# jennyshy
0 X. ^6 {0 L% I& Z4 R& R3 g* N
2 g+ G% @' ]* h5 D! \) b* J7 J
7 ~( K% y5 Z. W- c( V8 `    分化时间短的话有些细胞还不能发育成熟，比如神经元和少突胶质细胞

superlamp

试试N2分化培养基吧，我觉得效果挺不错的