请教个爬片的低级问题

zhaoyan1983

1.将盖玻片放入孔板的时候，盖玻片的两侧都接触到了培养液，那么在盖玻片的两侧应该都长有细胞才对，那么在计数、染色的时候，怎样才能保证镜下观察到的是一侧的细胞啊？
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2.可不可以不做爬片，直接在孔板里进行实验啊？

smiling

先回答一：我做过六孔板的。普通情况下6孔板里面每孔添加2ml培养液。如果做细胞爬片，先将玻片放入孔中，加400-600ul左右的细胞悬浮液，等贴壁后加至2ml。这样能够尽量保证细胞都在正面，但由于细胞类型和状态等因素限制，不保证你的细胞也能够长满，不过建议一试。
' Q. h# v- s* G% B2 v; d, x' {1 [问题二：由于正置显微镜不同倍数的镜头观察时将会出现在你的细胞培养上方，这样观察起来由于细胞培养板的厚度很不方便调整焦距。我觉得如果只处于观察的目的，可以尝试在板里做。另外细胞爬片很大原因是为了保存染色后的细胞，爬片能够制成永久封片方便保存。5 r, }0 L7 z; @$ n3 L$ z4 p( O! _. |
关于细胞爬片网上有很多资料，可以细看。

cony

只有正面跟培养板底部才会长细胞，至于观察，亦可以区分，焦距不一样的嘛。

zhaoyan1983

回复 2# smiling 8 L/ k% [+ q4 f0 K" C$ h

) y6 {& E7 D. k那也就是说碱性磷酸酶染色之类的实验都要在玻片上做吗？那要是在24孔或是更小的孔里边做的实验 鉴定起来不是很不方便？

zhaoyan1983

回复 3# cony
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    弱问一句，爬片的哪一面是正面啊？玻片不是两面都可以长细胞的吗？

xiaoma402716390

我们爬片是先加一些培养液，再加玻片，这样玻片和培养液之间产生一个表面张力，然后加入细胞悬液。

王乾

其实家细胞爬片不是为了节省抗体，而是为了把图片拍的更清楚质量更高而已。因为加了爬片，固定染色后就可以封到载玻片上了，这样就可以用显微镜或者共聚焦显微镜拍到高倍且高质量的图片，而在培养板里却很难拍到这样的图片。用爬片其实也不怎么麻烦，把爬片小心放入板空里面，用PBS洗个几遍，再照一到两个小时紫外就可以，当然有人推荐先用PBS洗，在高温灭菌，我的经验是再怎么洗一凉干总会有水渍，其次照一下紫外就可以达到灭菌的目的，我从来都没污染过。照完紫外，加上明胶或者多聚赖氨酸室温一到两小时，吸掉，PBS洗几遍，然后就可以传细胞了，由于是做细胞亚定位，所以细胞尽量传稀点，这样就可以保证一个视野下尽量有较少的不理想的细胞干扰，一般情况下24孔板的一个孔我铺3万左右的Hela细胞，效果很不错。