MTT测生长曲线，加二甲基亚砜前怎么弃上清液？

lpf19851105

我做的是大鼠骨髓间充质干细胞，最近几天在用MTT法测生长曲线，结果很怪异，第1、2天OD值都是在0.2作用，基本没差别，今天第3天拿去测，OD值平均下来比前两天还低（我设了10个复孔，检测波长是490），郁闷死了，每天一大早就爬起来去做实验，中午都没得休息，但是实验结果却总是令人失望，我想了一下，会不会是我弃上清的时候把甲赞结晶给吸出来了，导致结果出现错误？我是用200ul的枪头直接吸的……

lpf19851105

我的细胞数每孔约2000个，每加2~3个孔吹打一下细胞……

ICBDS

楼主，你是怎么做的按照时间梯度测啊？我做MTT只能做按照浓度梯度的啊

zsc78

在显微镜下看一看细胞是不是活得？吸培养液把板子倾斜，靠边吸，应该没有什么问题的。而且贴壁细胞的甲赞结晶也不容易脱落的。

若兰汀

我之前做过一次MTT法，老师叫我们把96孔板快速反转直接弃液不要拿枪头吸，不管贴壁牢不牢，200ul的枪吸得时候枪嘴处的吸力还是蛮大的，控制不好就很容易吸走，你把板反过来弃液后轻轻地扣在吸水纸上吸干遗液就好了，注意动作要快且轻柔.

lpf19851105

好的，谢谢，明天我试试看~

lilyhua

1、在处理细胞后要观察一下细胞，如果细胞增殖或死亡在镜下是能看出来的，细胞的形态是会发生变化的。8 [/ K6 Q, H; J
2、处理细胞前是否无血清培养？有的细胞在无血清的时候会死的很多，这导致处理跟不处理无差异，你可以换成低血清（2.5%或5%）
5 T# {* j4 ]# I7 J3、细胞处理后细胞更多的话，加入DMSO后你可以看到颜色是更紫的，更少的话颜色是更浅的，这样可以来判断你有没有把甲赞晶吸掉
+ h( i7 J7 u3 S# f" t- {4、在所有的吸液过程你都换成1ml的注射器，因为接触面积小，而且吸得更干，但是要轻轻的吸，否则细胞会因为负压太大吸掉，影响结果，特别是你的细胞贴壁不太紧的时候( T2 l5 G$ m! L& `5 t
5、为了防止边缘效应，除了周围的孔，最好连间隔也加入PBS，这样细胞会长的均匀
/ m+ t2 S3 n# x" U' f2 d) m6、细胞种植的密度也要适当，具体的你要自己摸下。时间梯度等也要做1 C; r5 n$ C6 d  o# c0 K$ O6 P
如果这些都避免了还不行的话，要怀疑一下你的处理方法了。当然，据说CCK8、XTT法等更敏感，如果不怀疑你的处理方法，你可以换一下检测方法- z7 `  w- j4 Z+ @! B3 ]0 t/ r( ^- ^
祝你成功

lilyhua

刚看了下，你的细胞数太少了，4000~6000个用的比较多，甚至1万、1万多。你最好查查文献你这个细胞做MTT用多少细胞

xiaodiao123

你的OD值太低了，一般测的是数据在0.3-0.7左右，才有可靠性。

xiaodiao123

你的OD值太低了，一般测的是数据在0.3-0.7左右，才有可靠性。