关于双荧光素酶报告基因检测

huahua2008

将一启动子连到pGL3-basic上，转染肌源干细胞，检测启动子的活性，目的质粒和内参质粒的质量比是50:1，前段时间做的时候，活性很强，最近不知哪出问题了，活性特别低，做法都相同，但现在萤火虫荧光素酶的值总是比海参的低，请各位大虾多多赐教！

siyue13

不懂，帮顶

siyue13

不懂，帮顶

daviddow

质粒可能丢失了。是不是培养基没用筛选试剂？再转染一下吧。建议筛选单克隆

frank110

如果出现这种情况，你能保证试剂、质粒转染的剂量、方法、检测的条件都没问题的话，问题就出现在你转的质粒的质量上，建议质粒重新提取，再做一次转染

janeyu

一般内参测得的数值会很高，如果你的内参测得的数很低，那说明你的pRL的质粒有问题，需要重新提取，如果是luc的荧光值很低的话那就是你接上去的启动子没有被启动，luc未被表达，可以检测下你构建的质粒的质量。

huahua2008

回复 janeyu 的帖子* R9 v% i; d$ E8 d: Q2 Q

8 W4 m2 j- S& k: I' Q请问内参能够代表转染效率吗？如果内参能够达到4、5万，能够说明转染效率很高吗？

janeyu

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$ \8 B* U+ j2 f) w; E( r  A  `( Z: x8 u
) \6 B- N3 y; H* i7 h如果内参质粒pRL没有问题的话，内参的值可以反映转染的效率的情况，内参只有4、5万，算是比较小的，我们用十几纳克pRL做转染的内参测到的数值一般都是几十万到几百万的。

布布vs果果

内参转50ng，测得值只有几万，萤火虫荧光素酶的值在几十万。还能继续增加内参的量吗？

webber43

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0 H$ z: r" g4 z/ ]/ @6 p' B/ f; G( |7 W6 ]1 P4 u! Q7 V
您好！你说的内参pRL质粒是什么哦？为什么那个需要数值很高才行啊？