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关于克隆效率问题 [复制链接]

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楼主
发表于 2011-1-9 20:11 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位研究员:8 K, y" G. f9 y. p# j9 G, v/ g
    本人最近一直在思考一个问题,那就是克隆的效率还能提多高?最终能不能达到体外受精的效率呢?请各位研究员发表您的见解。
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沙发
发表于 2011-1-9 20:25 |只看该作者
先抛砖引玉。
6 H5 z% a, J% S# r/ J" J我觉得克隆的效率可能不会像IPS诱导那样,随着其研究的推进而不断得到提高。, |' A- J% z3 C) Z- M; Y7 F
因为IPS在诱导过程中可以有针对性的、特异的改变培养条件或者更换供体细胞等手段来提高效率。而克隆是卵胞质随机的reprogram体细胞,重编程的是否全面,是否每一次都一致,很难讲。卵子reprogram过程的相关因子研究并不如IPS那样清楚。没有办法做到像IPS那样有针对性的添加相关的因子。自从1997年多利诞生到现在,世界各国克隆专家一致在致力于克隆效率改进,但是效果甚微,因此我觉得克隆的效率不会得到显著的提高。3 U/ [: T! w8 i( {/ K
一点拙见,请大家指正。
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藤椅
发表于 2011-1-10 16:56 |只看该作者
回复 songzxj 的帖子
3 t/ c6 l# J* j  b3 O4 [
* |9 e; j8 m7 h6 P& n: Z( u首先核移植的效率比正常用四个因子诱导的效率要高一些!并且核移植重编程得到的ES细胞要比iPS细胞更接近ES细胞。
2 I2 }: J0 M8 H' Y; v, x" viPS重编程和核移植都可以看成是随机的。iPS重编程因子发现也是源于卵子具有重编程能力,并从中发现了四个因子。4 M$ }0 ^$ E& d$ s8 I: L
确实iPS更好容易manipulation,但是四个因子重编程得到的iPS常常面临着不完全重编程的问题,影响iPS的分化潜能。再说核移植得到的囊胚也不是不能认为干涉的啊,在iPS中有效的一些小分子有一些,比如影响染色体结构的小分子也能促进核移植的效率的。2 c" M; X2 \) G5 K& w8 a& r0 F

7 _' B2 R& w* ~$ o: I7 o
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板凳
发表于 2011-1-10 17:51 |只看该作者
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因为是HMC,体系都还不错,囊胚率也高,第四周受体怀孕检测有时达100%,而且转基因有时更好,但问题是怀孕中期有吸收的,也有中后期死亡的,畸形的,还有预产期孕体给受体信号不足而产道不开滞产死亡的,产后哺乳期也有死亡。总之,要解决整个体系问题,如楼上所说,或许可在囊胚阶段加以干涉。
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报纸
发表于 2011-1-10 20:58 |只看该作者
回复 张也行 的帖子
  ?" r/ |: R& n$ s: w: O% t+ |7 I+ H
谢谢!3 Y- x% [. H3 Z+ h7 I$ o
非常赞同你的一些观点,核移植效率要比IPS的效率要高,且NTES比IPS更接近ES细胞(这是去年一nature paper求证过的)。
7 O  m7 i8 h8 d4 d
. T; O7 l  ~4 w- R# h- Z我们知道四因子发现源于卵子的重编程(或者细胞融合过程的重编程,我不确定),但是这些发现却没有应用于克隆效率的改进!你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆?我觉得可能的原因还是前者。7 d- y1 }* Z& w, u
. j: g$ V  U! @0 ^" a$ F* A
所以我想IPS中有效的因子对于提高效率可能并不起作用。
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地板
发表于 2011-1-10 21:12 |只看该作者
回复 douhw 的帖子7 W2 r; i. C+ j& G* i

( T1 b, J+ `# v$ i6 g不好意思,我其实是不看好HMC的,可能是偏见吧。不过它在牛的应用上真的很成功。6 M! Z, t+ z/ B8 B; N% V$ w
' |8 C6 w/ c0 B- ]6 ]  X3 ~' J
请问你做的是什么动物?第四周检测怀孕率,猪吗?
9 w% i; i+ Y( F9 o: }- X6 j
; x4 D7 j# ]; E" B- [, V+ K怀孕中期吸收的现象是很多克隆动物共有的问题了,这个追根溯源应该还是重编程不完全造成的,所以说体外囊胚率高并不一定胚胎质量好,它只是其中一个参数。
+ q4 G: q: w* j0 _/ ^) c* m
& g9 R5 K5 a6 P$ N( u9 n解决重编程问题的途径不外乎那么几个时间点:供体细胞、早期胚胎和囊胚期。但是前两个时期算是预防的话,那囊胚期只能算是补救治疗了,因为那个时候胚胎已经由多潜能细胞期重新进入分化过程。
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发表于 2011-1-10 22:16 |只看该作者
回复 songzxj 的帖子
& ?+ b9 D; l3 L  r
4 ~. }+ C5 X4 V* a! @! X0 }# H
, `* [. e: {& k" ~: U. Y6 H
你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆?我觉得可能的原因还是前者。

# d+ Q8 R; y1 Q; E1 l  `我觉得也不是。在成熟的MII期的卵子中是有这些因子。虽然Yamanaka曾在文献中说iPS灵感来自核移植,但是iPS最初是从ES特异性的基因库中筛选出来的,分离出来的是因子都是与多能性相关的关键因子。但是,我觉得我们不应该吧核移植得到的一个完整的胚胎,也就是说核移植获得的是全能型的细胞(totipotent),从发育的囊胚中分离出了ES细胞。而四个因子诱导的iPS细胞是多能性的(pluripotent)。核移植获得的融合胚胎能生长到囊胚阶段,从中分离出来的ES细胞(NT-ES)与正常fertilize,分离出来的ES更接近也就容易接受了。4 e9 v  E( @. p, u
所以,iPS应该更多的向核移植“学习”,比如周琪和高绍荣都试过分析成熟卵子中的蛋白质以期望获得更多,更关键的重编程因子。
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发表于 2011-1-11 09:55 |只看该作者
回复 songzxj 的帖子* p/ `) e" o8 H7 {# \
* D9 E8 G8 ?  v% N8 `* w1 I
HMC也有自身的长处与不足,但总体来说,效率换好。我所做的动物是猪。) N: a- F, L" R" X2 S+ H

% R" k* F% \$ {我觉着,重编程最重要的处理阶段是在融合前后,因为在体细胞进入卵胞质、融合后,重编程便开始了。
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ambassador + 5 + 10 谢谢分享,能详细讲讲融合前处理以及融合后.
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发表于 2011-1-13 11:25 |只看该作者
本帖最后由 ambassador 于 2011-1-13 11:29 编辑 8 o( ~0 K8 D2 ~3 W
douhw 发表于 2011-1-11 09:55 ( y: t  N# p' Q. q: d7 S8 d
回复 songzxj 的帖子) O; o; T3 f6 v- a

' i+ e7 b% j' k0 bHMC也有自身的长处与不足,但总体来说,效率换好。我所做的动物是猪。

0 n$ F: x3 `1 }/ s& }' b& @; a+ I' l( W8 t0 V$ y0 e+ G- ?. b
我个人觉得不足之处是需要提供大量的卵母细胞(这个在大型猪场可以提供,也就不是问题了),其他的不足之处,还请多指教?
$ {  c! D7 T6 M: V8 V
" S% v  @) i9 R3 u& q- x% _2 o0 M还有在重编程最重要的处理阶段,融合前是只对受体细胞(去核的卵母细胞)进行处理?融合后的体外成熟除了常规的方法外是如何处理?
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发表于 2011-1-13 18:45 |只看该作者
回复 ambassador 的帖子7 N' H0 ^3 z3 f3 d5 \8 f# S

6 I4 w% w  e. K4 G1 }其实我认为,透明带的缺失、以及如在制作嵌合体方面等都存在与显微注射相比较的不足。, p. t& x* ]- O* }$ h
" O# z% z7 T9 K; h6 b8 Q* \# M- B
而且关于重合编程,我认为融合前对卵母细胞的处理即去核阶段,融合后对重构胚的处理是最重要的处理阶段,以为此时供体细胞与卵胞质融合而编程开启。但是,尚未付诸实施。
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