关于克隆效率问题

songzxj

各位研究员：) t6 M9 S8 q  @+ X/ t, |
    本人最近一直在思考一个问题，那就是克隆的效率还能提多高？最终能不能达到体外受精的效率呢？请各位研究员发表您的见解。

songzxj

先抛砖引玉。9 N/ s5 l9 I# k$ ?, D
我觉得克隆的效率可能不会像IPS诱导那样，随着其研究的推进而不断得到提高。! {; b6 `% C0 b; V' d
因为IPS在诱导过程中可以有针对性的、特异的改变培养条件或者更换供体细胞等手段来提高效率。而克隆是卵胞质随机的reprogram体细胞，重编程的是否全面，是否每一次都一致，很难讲。卵子reprogram过程的相关因子研究并不如IPS那样清楚。没有办法做到像IPS那样有针对性的添加相关的因子。自从1997年多利诞生到现在，世界各国克隆专家一致在致力于克隆效率改进，但是效果甚微，因此我觉得克隆的效率不会得到显著的提高。! ~+ G+ j- E, A& t* K' |( J! a
一点拙见，请大家指正。

张也行

回复 songzxj 的帖子. S1 d5 ]  \. t4 A+ ]

" N8 n( G( B5 _  z首先核移植的效率比正常用四个因子诱导的效率要高一些！并且核移植重编程得到的ES细胞要比iPS细胞更接近ES细胞。
0 x+ S8 A) O; Z, }* z; I# x9 ViPS重编程和核移植都可以看成是随机的。iPS重编程因子发现也是源于卵子具有重编程能力，并从中发现了四个因子。
+ t. i5 o, O& e$ _: _4 D* g确实iPS更好容易manipulation，但是四个因子重编程得到的iPS常常面临着不完全重编程的问题，影响iPS的分化潜能。再说核移植得到的囊胚也不是不能认为干涉的啊，在iPS中有效的一些小分子有一些，比如影响染色体结构的小分子也能促进核移植的效率的。
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# L0 r8 [6 }  _1 Z. G8 ], }; r! y5 H

douhw

因为是HMC，体系都还不错，囊胚率也高，第四周受体怀孕检测有时达100%，而且转基因有时更好，但问题是怀孕中期有吸收的，也有中后期死亡的，畸形的，还有预产期孕体给受体信号不足而产道不开滞产死亡的，产后哺乳期也有死亡。总之，要解决整个体系问题，如楼上所说，或许可在囊胚阶段加以干涉。

songzxj

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# l6 C8 y2 c5 [6 ]
5 g0 N- ^9 z8 k0 t+ m. u谢谢！
, `2 R) I+ y- E, A非常赞同你的一些观点，核移植效率要比IPS的效率要高，且NTES比IPS更接近ES细胞（这是去年一nature paper求证过的）。9 |- h6 z4 `# [* L/ E: F
  p* u: ^5 p( {5 g
我们知道四因子发现源于卵子的重编程（或者细胞融合过程的重编程，我不确定），但是这些发现却没有应用于克隆效率的改进！你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。- c8 q, i' K/ S  w6 L( C0 B  u) I, O

: V. i- g. ^7 L% b所以我想IPS中有效的因子对于提高效率可能并不起作用。

songzxj

回复 douhw 的帖子, E# k- H/ v* b# ^% n2 b$ F
- |% x& j% |' A' T/ J  S* g
不好意思，我其实是不看好HMC的，可能是偏见吧。不过它在牛的应用上真的很成功。$ B7 ?+ r; H7 P* G! _6 z

7 t! _" q9 z( R  B* \2 h9 c请问你做的是什么动物？第四周检测怀孕率，猪吗？
' z& h$ r6 f) @9 H% s* b/ x2 y8 o8 i. g
怀孕中期吸收的现象是很多克隆动物共有的问题了，这个追根溯源应该还是重编程不完全造成的，所以说体外囊胚率高并不一定胚胎质量好，它只是其中一个参数。
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解决重编程问题的途径不外乎那么几个时间点：供体细胞、早期胚胎和囊胚期。但是前两个时期算是预防的话，那囊胚期只能算是补救治疗了，因为那个时候胚胎已经由多潜能细胞期重新进入分化过程。

张也行

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5 Q$ t1 L3 A3 U- ^2 d+ C4 d5 E

你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。

3 o+ P5 \! j+ V* L/ s/ b: @! R7 Y我觉得也不是。在成熟的MII期的卵子中是有这些因子。虽然Yamanaka曾在文献中说iPS灵感来自核移植，但是iPS最初是从ES特异性的基因库中筛选出来的，分离出来的是因子都是与多能性相关的关键因子。但是，我觉得我们不应该吧核移植得到的一个完整的胚胎，也就是说核移植获得的是全能型的细胞（totipotent），从发育的囊胚中分离出了ES细胞。而四个因子诱导的iPS细胞是多能性的（pluripotent）。核移植获得的融合胚胎能生长到囊胚阶段，从中分离出来的ES细胞（NT-ES）与正常fertilize，分离出来的ES更接近也就容易接受了。
) i8 t% b' {" r9 ~# f所以，iPS应该更多的向核移植“学习”，比如周琪和高绍荣都试过分析成熟卵子中的蛋白质以期望获得更多，更关键的重编程因子。

douhw

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) q+ l4 g- m. y; a5 _$ D& X- J7 W5 n
HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。4 D; p$ U" [. v3 V) N6 D

" \$ j: `; H: {+ K$ S我觉着，重编程最重要的处理阶段是在融合前后，因为在体细胞进入卵胞质、融合后，重编程便开始了。

ambassador

- H! n( ]/ m. c

douhw 发表于 2011-1-11 09:55
. \( I* Q# _1 g回复 songzxj 的帖子
9 K; n2 R7 \' m# U1 \( U! {6 u; B* k  E$ k: F
HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。

: t# ?$ }7 ~6 g8 g2 v( F9 I0 u( Q( d

  \1 i1 A# s  W( Z: A我个人觉得不足之处是需要提供大量的卵母细胞（这个在大型猪场可以提供，也就不是问题了），其他的不足之处，还请多指教？, A! h) H; A/ h& j
( P4 K6 t  m) i, T
还有在重编程最重要的处理阶段，融合前是只对受体细胞（去核的卵母细胞）进行处理？融合后的体外成熟除了常规的方法外是如何处理？

douhw

回复 ambassador 的帖子1 J9 Q. J3 |# R, L% U4 Y
, ?8 V. k3 ~- m/ Y- s7 S2 \
其实我认为，透明带的缺失、以及如在制作嵌合体方面等都存在与显微注射相比较的不足。" W9 j1 H, ]* g; N% b' l
0 c( f. \# J: z$ P: h3 V
而且关于重合编程，我认为融合前对卵母细胞的处理即去核阶段，融合后对重构胚的处理是最重要的处理阶段，以为此时供体细胞与卵胞质融合而编程开启。但是，尚未付诸实施。