关于克隆效率问题

songzxj

各位研究员：
$ C: T7 y! z* F5 |    本人最近一直在思考一个问题，那就是克隆的效率还能提多高？最终能不能达到体外受精的效率呢？请各位研究员发表您的见解。

songzxj

先抛砖引玉。4 L  q/ ]; \0 d4 ^  |- O7 t
我觉得克隆的效率可能不会像IPS诱导那样，随着其研究的推进而不断得到提高。
% H. C. j) K; V6 k& [: F因为IPS在诱导过程中可以有针对性的、特异的改变培养条件或者更换供体细胞等手段来提高效率。而克隆是卵胞质随机的reprogram体细胞，重编程的是否全面，是否每一次都一致，很难讲。卵子reprogram过程的相关因子研究并不如IPS那样清楚。没有办法做到像IPS那样有针对性的添加相关的因子。自从1997年多利诞生到现在，世界各国克隆专家一致在致力于克隆效率改进，但是效果甚微，因此我觉得克隆的效率不会得到显著的提高。
& ~: s' h2 e. j: F3 u+ U一点拙见，请大家指正。

张也行

回复 songzxj 的帖子* O7 P9 J: l$ j$ y; I! [8 T

6 Y/ V$ @7 h6 F7 L9 o" J5 b首先核移植的效率比正常用四个因子诱导的效率要高一些！并且核移植重编程得到的ES细胞要比iPS细胞更接近ES细胞。
" r7 F$ X8 a7 ]5 MiPS重编程和核移植都可以看成是随机的。iPS重编程因子发现也是源于卵子具有重编程能力，并从中发现了四个因子。
0 R" E0 g2 |( a$ x  Z+ V& H3 K确实iPS更好容易manipulation，但是四个因子重编程得到的iPS常常面临着不完全重编程的问题，影响iPS的分化潜能。再说核移植得到的囊胚也不是不能认为干涉的啊，在iPS中有效的一些小分子有一些，比如影响染色体结构的小分子也能促进核移植的效率的。
0 w6 X3 `0 j# T1 w, }; V9 a5 T9 i
( y7 J4 G9 U9 z. `. d* h

douhw

因为是HMC，体系都还不错，囊胚率也高，第四周受体怀孕检测有时达100%，而且转基因有时更好，但问题是怀孕中期有吸收的，也有中后期死亡的，畸形的，还有预产期孕体给受体信号不足而产道不开滞产死亡的，产后哺乳期也有死亡。总之，要解决整个体系问题，如楼上所说，或许可在囊胚阶段加以干涉。

songzxj

回复 张也行 的帖子5 q  a# `% Y- s2 {" M7 Y8 ~" M- v2 C% e
% p& M6 ]" F4 u5 f5 u: Z
谢谢！
6 e3 h( o: b( [9 j% K+ o6 {非常赞同你的一些观点，核移植效率要比IPS的效率要高，且NTES比IPS更接近ES细胞（这是去年一nature paper求证过的）。- K/ Z0 m  i) f( j8 u& w; O

8 B: s0 @/ m+ |+ U我们知道四因子发现源于卵子的重编程（或者细胞融合过程的重编程，我不确定），但是这些发现却没有应用于克隆效率的改进！你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。- _# \6 U  h/ P! `( g+ |# C

( D. v) ~. {! ~7 v: P所以我想IPS中有效的因子对于提高效率可能并不起作用。

songzxj

回复 douhw 的帖子
/ \) Z3 r1 |- c1 @* P
4 c' `6 g: K7 w不好意思，我其实是不看好HMC的，可能是偏见吧。不过它在牛的应用上真的很成功。
5 [1 ?8 ]) C$ r& G3 A! n  {
( |( W; x" z. {1 C2 T请问你做的是什么动物？第四周检测怀孕率，猪吗？6 S- a9 H- K% i' v0 C( A4 v9 k
9 m% ], e9 V- N
怀孕中期吸收的现象是很多克隆动物共有的问题了，这个追根溯源应该还是重编程不完全造成的，所以说体外囊胚率高并不一定胚胎质量好，它只是其中一个参数。
' @: s! z) L1 J- W  b5 t- U" y" y6 d6 R, y2 T4 v3 _% u" G
解决重编程问题的途径不外乎那么几个时间点：供体细胞、早期胚胎和囊胚期。但是前两个时期算是预防的话，那囊胚期只能算是补救治疗了，因为那个时候胚胎已经由多潜能细胞期重新进入分化过程。

张也行

回复 songzxj 的帖子
2 G( y$ c. U; U9 c# J( A9 e7 W5 B/ |" e
% O6 u* [8 H1 H0 N

你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。

; y1 `4 ?: _6 r( w6 L我觉得也不是。在成熟的MII期的卵子中是有这些因子。虽然Yamanaka曾在文献中说iPS灵感来自核移植，但是iPS最初是从ES特异性的基因库中筛选出来的，分离出来的是因子都是与多能性相关的关键因子。但是，我觉得我们不应该吧核移植得到的一个完整的胚胎，也就是说核移植获得的是全能型的细胞（totipotent），从发育的囊胚中分离出了ES细胞。而四个因子诱导的iPS细胞是多能性的（pluripotent）。核移植获得的融合胚胎能生长到囊胚阶段，从中分离出来的ES细胞（NT-ES）与正常fertilize，分离出来的ES更接近也就容易接受了。
& F+ ~" }. y- M0 _9 j  F. L所以，iPS应该更多的向核移植“学习”，比如周琪和高绍荣都试过分析成熟卵子中的蛋白质以期望获得更多，更关键的重编程因子。

douhw

回复 songzxj 的帖子. f2 u6 T4 h, m8 Q2 _% y
* s. L! ~: D+ l. k/ J8 _
HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。2 p+ \9 P* Q# x3 s6 f- P
5 G( O$ e4 G8 d. E
我觉着，重编程最重要的处理阶段是在融合前后，因为在体细胞进入卵胞质、融合后，重编程便开始了。

ambassador

- B, i( H5 _4 h! c

douhw 发表于 2011-1-11 09:55
) e+ h/ e4 N- d4 w回复 songzxj 的帖子
) Z  R' B$ `5 V$ M- w1 X* L1 f6 p5 Y: p* k; z! ~
HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。

# f7 C( P- y0 l- _. n2 ]6 T! m3 d0 l! n4 R1 S8 Q- |
我个人觉得不足之处是需要提供大量的卵母细胞（这个在大型猪场可以提供，也就不是问题了），其他的不足之处，还请多指教？) L/ ?$ g3 L9 E6 \: ~- v% a4 T
5 O- ?  {+ T  B  s1 h1 c
还有在重编程最重要的处理阶段，融合前是只对受体细胞（去核的卵母细胞）进行处理？融合后的体外成熟除了常规的方法外是如何处理？

douhw

回复 ambassador 的帖子
1 m- C1 M& _; |6 Y/ n! Z& f6 o
其实我认为，透明带的缺失、以及如在制作嵌合体方面等都存在与显微注射相比较的不足。. c2 \6 f( D% z2 u. A5 U

1 u- v6 a( X4 A% p" |5 c3 n而且关于重合编程，我认为融合前对卵母细胞的处理即去核阶段，融合后对重构胚的处理是最重要的处理阶段，以为此时供体细胞与卵胞质融合而编程开启。但是，尚未付诸实施。