大家好，希望大家帮忙！最近用病毒做iPS细胞诱导，发现AP染色后的图片是这样

Helena110

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最近用病毒做iPS细胞诱导，发现AP染色后的图片是这样:'( （如图1)：请大家帮忙分析一下是怎么回事？谢谢！+ [$ a4 j6 \* H; k5 B4 j

hylok

细胞很生气，后果很严重，哈哈，开个玩笑！

hcluo

AP染色后怎么是黑色的啊，应该显示红色才对啊。你的图片做处理了吗？对了，你有没有做阳性对照啊，我们实验室以前用ES做阳性对照，效果还行。另外，检测和检查一下试剂盒有没有问题。

panyanfei

黑白照片？

ghfvcat

这样的细胞，以前我用蛋白做人iPS的时候遇到过，生长呈克隆状，但是细胞根本不像干细胞，生长得也很慢，还老是往外爬一些纤维状细胞，AP染色呈阳性，但基本无法扩大培养鉴定，推测是复性的蛋白活性不够导致的重编不完全？也没啥好办法，后来就放弃了，改用病毒了，给你看看我的图片

ghfvcat

你第二张图看上去还有点像的说，没染色的照片呢？

Helena110

回复 hcluo 的帖子
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对照组的图片就是所发图片周围的细胞一样，没有大的被染色的区域。核小被染色，细胞不被染色。 我用的碧云天的AP染色液，染出来是蓝色的。拍出来不知道怎么就接近黑色了。

Helena110

Helena110

回复 ghfvcat 的帖子4 a+ u' W3 L  X8 j$ O+ S

9 h( K, Y& r( D0 {$ e- W8 _8 n) a我拍出来的细胞图片不知道为什么大多数都是这样，feeder感觉比你的图片2差好多，不知道是培养液的问题 还是什么别的问题。培养液用的DMEM高糖，不含丙酮酸钠，加lif的，加Gln，P-S，NEM，2-巯基乙醇。请指教下，非常感谢啊。

hcluo

如果觉得AP不是很好，建议做一做免疫荧光或者RT-PCR的标志物，以此来检测IPS的效果。