小鼠骨髓间充质干细胞

皮搋子

请问骨片法培养的是间充质干细胞吗？
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bianhuimou

回复 sping 的帖子8 y6 c" w" t- H: C! y( H

/ @3 X1 h( q$ w5 R! P您养过小鼠MSC?我用stem  cell 的培养基都养不出来，请您指点一下！

细胞海洋

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4 k  X. X5 A1 F8 E( _( P, y# l9 V- B建议你详细说明你的问题 发新帖提问

xiaoyurly

如大家所言，小鼠MSC确实很难养出来，对血清要求高、纯化难且容易老化。4 z7 ^# V* G0 \
我用4-5周龄的C57小鼠培养，2只小鼠的全骨髓放1个10cm盘，用20%FBS+αMEM培养基。3天时换全液，此后每2天换液，5天时即可看到有克隆长出，一般7天时可传代。传代时胰酶消化时间要严格把握，随着传代杂细胞（主要是CD45+ HSC）会逐渐去除。到5代时MSC比较纯可用于后续实验（如分化、移植等）。# q! O- |$ `! {- _
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分离骨髓时用无菌纱布剥离肌肉，放在研钵里轻轻用力将骨头研碎，这样比较省时省力。, }3 t7 x* c3 S
ps. 曾经养过balb/c小鼠的MSC，私以为比C57的难培养一些。

bianhuimou

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6 A) h' x/ T0 N& p8 o: D1 a1 o# v  e3 Q/ ?( J0 ^% u
您好，请问您用的培养基和血清的货号能提供吗？

bianhuimou

回复 xiaoyurly 的帖子: ]* ^* ~9 H2 D
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我用买的stem cell  的培养基都没有养成功，感觉细胞很容易分化，不知您是否能提供你的培养基和血清的货号？我想试着再养养

bathpp2007

liuxiao2006 发表于 2011-6-24 11:05 1 s: C$ A# O) X8 W* q
我用的是DMEM/F12的培养基加上进口胎牛血清（10%），细胞长势很好啊。可能与细胞株有关吧，我用的是纯化过的 ...

1 j1 T) B0 ^9 P, n' D5 H% @3 o
是小鼠的吗? 如何纯化的呢？" M$ ^* f( @/ q* S6 R# [0 k) I
请指点

asejon

: t& w+ X7 A( x
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回复 clairezy1983 的帖子3 W+ l* v# Q' v" H9 D: ^
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以前还真不知道可以用胶原酶I溶液消化骨片提取间充质细胞，见识了，但是不是会混入骨细胞呢？会不会诱导干细胞成骨分化呢？

clairezy1983

回复 asejon 的帖子( ^8 c" X+ ]! V  ~7 K' k
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不会，培养基没有适合成骨分化的条件啊，骨细胞更不会吧，我觉得那些干细胞应该是从骨膜上爬出来的

asejon

成骨细胞也会从骨片中爬出，这是获取成骨细胞的方法，如果成骨细胞跟间充质干细胞一起培养，成骨细胞必然会分泌物质而调节干细胞向成骨方向分化