小鼠骨髓间充质干细胞

皮搋子

请问骨片法培养的是间充质干细胞吗？
7 @) P8 j  Y* l) @

bianhuimou

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2 k  I2 ?. m) Q1 _7 k. j* V" s5 {0 X* j0 J1 w8 o
您养过小鼠MSC?我用stem  cell 的培养基都养不出来，请您指点一下！

细胞海洋

回复 bianhuimou 的帖子) G" [$ E7 [5 w  f  S- i
" P2 S6 P: n+ A9 x0 k
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xiaoyurly

如大家所言，小鼠MSC确实很难养出来，对血清要求高、纯化难且容易老化。* A! K1 b( \( I( ^
我用4-5周龄的C57小鼠培养，2只小鼠的全骨髓放1个10cm盘，用20%FBS+αMEM培养基。3天时换全液，此后每2天换液，5天时即可看到有克隆长出，一般7天时可传代。传代时胰酶消化时间要严格把握，随着传代杂细胞（主要是CD45+ HSC）会逐渐去除。到5代时MSC比较纯可用于后续实验（如分化、移植等）。9 c$ j, Q" p0 V1 F( W. j

6 F7 X+ z/ v9 t( M/ h& [/ v) |4 `: g分离骨髓时用无菌纱布剥离肌肉，放在研钵里轻轻用力将骨头研碎，这样比较省时省力。- b( |) s( G0 K
ps. 曾经养过balb/c小鼠的MSC，私以为比C57的难培养一些。

bianhuimou

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5 @1 O7 U9 e/ v+ a
0 E* C6 D+ X4 m0 p+ d/ k您好，请问您用的培养基和血清的货号能提供吗？

bianhuimou

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( p0 K, v. r9 N8 q! ]+ i* @# f  t8 t* M2 u
我用买的stem cell  的培养基都没有养成功，感觉细胞很容易分化，不知您是否能提供你的培养基和血清的货号？我想试着再养养

bathpp2007

liuxiao2006 发表于 2011-6-24 11:05 - S6 E# T/ w( s- N0 q+ R
我用的是DMEM/F12的培养基加上进口胎牛血清（10%），细胞长势很好啊。可能与细胞株有关吧，我用的是纯化过的 ...

& Z2 e8 C( U$ M是小鼠的吗? 如何纯化的呢？+ ]  T" `- t. g) X& e3 s1 y
请指点

asejon

) x. B' W- Z2 m) z
# E8 I) \" Q. V2 ^/ g  L% H
回复 clairezy1983 的帖子* ^1 }1 A/ N1 o3 x/ ?8 e+ N
( Q; ]  W7 i. w
以前还真不知道可以用胶原酶I溶液消化骨片提取间充质细胞，见识了，但是不是会混入骨细胞呢？会不会诱导干细胞成骨分化呢？

clairezy1983

回复 asejon 的帖子3 {( `; I  @6 J2 v1 n/ T3 T; J* Y

- g5 p6 W  Y- ?8 l$ w7 t2 D不会，培养基没有适合成骨分化的条件啊，骨细胞更不会吧，我觉得那些干细胞应该是从骨膜上爬出来的

asejon

成骨细胞也会从骨片中爬出，这是获取成骨细胞的方法，如果成骨细胞跟间充质干细胞一起培养，成骨细胞必然会分泌物质而调节干细胞向成骨方向分化