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[请教] 二次PCR怎么设计才好? [复制链接]

sidalin301

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楼主
发表于 2011-4-9 19:29 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
第一次PCR有单一明亮的条带, 想多扩增几管备用, 于是直接取第一次的PCR产物1ul 进行了二次PCR, 结果是模糊的一片, 请问有谁知道是什么原因?
% `7 k% e  r* y6 I+ k这种做法我以前尝试过多次, 结果都还可以, 突然有一次就这样了, 想不出什么原因, 郁闷!
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amigel

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沙发
发表于 2011-4-11 10:19 |只看该作者
把第一次PCR产物做个系列稀释,10倍100倍,这样然后取1ul扩.
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LiuRoc

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藤椅
发表于 2011-4-11 10:45 |只看该作者
一扩的引物是特异性的还是兼并性的？若是兼并性的二次扩的时候需要提高退火温度。
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sidalin301

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板凳
发表于 2011-4-12 15:48 |只看该作者
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回复 amigel 的帖子3 N6 C  x3 V9 w6 V) y

+ U( I% ^& ]3 ^谢谢！今晚就采用这种方法试一下！
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sidalin301

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报纸
发表于 2011-4-12 15:50 |只看该作者
回复 LiuRoc 的帖子
: j% Z1 H9 o9 K( k  c. N$ t6 t
9 @4 w$ k; `6 |3 e" v一扩的引物是特异性的，就只有一条明亮的条带，以前这样做过很多次，都没有失过手，不知道这次是什么原因？
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sidalin301

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地板
发表于 2011-4-12 15:51 |只看该作者
百思不得其解啊，郁闷!
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regene

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7楼
发表于 2011-4-13 14:39 |只看该作者
模板浓度太高，稀释就好，其实还是巢式PCR效果最好。
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