做做免疫组化石蜡切片好还是冰冻切片好？

sidalin301

做免疫组化石蜡切片好还是冰冻切片好？9 X' a3 _0 Z5 y( I/ ]0 w5 y
大部分人都说石蜡切片好，可我看到好多外文文献都是用的冰冻切片，到底哪个好一些？5 u8 t5 B3 T! a1 Y! Q6 m7 P
本人要做背根神经节、脊髓、脑干和大脑的免疫组化，现在正处于抉择阶段，请有经验的专家给些建议，多谢了！
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zhangyan813

我建议你做冰冻切片，我刚做了大鼠睾丸的冰冻切片，效果很好，给你以下建议：
0 x1 R# b7 J$ ~  1. 做冰冻切片最关键的是固定和脱水。你也可以提前灌注固定，这样对于大脑组织可能更好一点。我用的是10%，15%和18%的蔗糖溶液做的脱水，一开始脱水1个小时，效果很不好，后来减少到40分钟，效果就好很多了。你可以根据你的样品的年龄、大小等再试条件。
- ^% D, i4 m! s" B 2. 载玻片一定要用多聚赖氨酸处理后才好用。现在试剂公司有处理好的片子买，直接买一包回来做就可以了，很方便的。3 H/ x! b1 B% S% C
3. 抗体的浓度要比直接作用于细胞的浓度要大一些，这样做出来的免疫组化才好看。

sheepthief

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- V2 i! m6 O9 _  p$ t# k石蜡切片对于其他组织比较好，但对于脑和脊髓等组织还是做冰冻切片比较好，因为石蜡切片细胞和组织缩水都比较严重，脑和脊髓等含水量多的组织作石蜡切片会导致细胞严重变形，影响观察。, T, g1 L0 \5 h; M5 v
一般建议选大鼠，经水合氯醛（400 mg/kg）腹腔注射麻醉满意后，立即用0.9% 盐水及4%多聚甲醛进行灌注，灌注完毕后取出脊髓及大脑，将其置入含4% 多聚甲醛液中后固定24 h(4 ℃)，转入30%蔗糖溶液中脱水72～76 h(4 ℃)，0.01 mol/L、pH7.3 PBS清洗后，将脊髓和大脑组织分别使用冰冻包埋剂包埋，冰冻切片机行横向脊髓及大脑组织切片，片厚16 μm，贴在涂有多聚赖氨酸的载玻片上，-20 ℃冻存备用。
$ q) A* ^4 ^1 h0 A* [0 Z$ l我不是专业的，但是和同学做过玩

sidalin301

回复 zhangyan813 的帖子+ O# {( U" U$ R# C! l* u
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多谢指点！感激万分！

sidalin301

回复 sheepthief 的帖子
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9 w4 o. @. ]  ^+ R0 R多谢指点！感激万分！

gqs2872022

国外的一般都做冰冻切片，但是理论上来说，石蜡切片的细胞形态比冰冻切片的要好很多，
" ~8 z/ C0 D; w! f4 r特别是在组化上，需要更清晰的形态分布。冰冻切片的话就视技术员的技术好坏而定，高手的话基本和石蜡没多大区别，但技术不好的话，对细胞核/浆还是有影响的。另外就是，还容易产生冰晶导致切的不好，所以一定要做冰冻切片的话，用梯度蔗糖平衡很重要，另外就是冷冻前要把液体吸干。
- W7 Y  q. S" F/ O5 ~/ O还有就是，冰冻的组化背景还是偏高，之前我看到的发NATURE等一些的文章，虽然抗体着色好，但其背景颜色较高，用病理的专业评判就是不合格的片子，偏偏人家也能发NATURE，要是换成你我，估计人家是不予理会的。所以组化还得好好做，冰冻片子多切一些或者切剩的标本保存起来不要扔掉了。
! Z: b! N$ N, l2 [% {' o好好努力吧，个人认为，选哪种方法都关系不大。关键是把组织处理好，把组化做好！

sidalin301

回复 gqs2872022 的帖子5 U0 f$ i# `/ r
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你能不能说的具体一点？像上面2位说的那样，把自己的经验传授一些，感觉你说的都是大话空话！

sidalin301

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0 _) w1 @6 R1 n/ {# x0 F& j
- |- c( y9 i# d# c0 e9 l; z6 e+ c再问一下，固定脱水好之后的组织如果不急于做切片该怎么保存？

sidalin301

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" W& Q/ [4 E7 |, z5 }再问一下，固定脱水后如果不急于做切片组织该怎么保存？

sidalin301

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再问一下，固定脱水后如果不急于做切片组织该怎么保存？