新手求助，请来看看我养的胚干出什么问题了

wang66

之前自己和实验室里从来没养过胚干，老板有意要往此方向研究，也只有硬着头皮边尝试边烧钱了 : V9 R8 K4 D0 |; j( V2 D
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这是刚拿来养了3天的图片，感觉那个时候的细胞状态好像不太好，而且也有分化.) c1 C. ?5 O5 M6 }+ l9 B# u. b

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wang66

然后这是继续养了5天之后的图片，感觉细胞全部都死了，都有空洞了···- x3 H6 z, E' l5 u1 Q; ?. _( q
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请各位一起来帮我分析一下，是什么原因，先谢过啦~

juan880929

是人的胚胎干细胞还是小鼠的

jefferson

不是相差照片,不能准确判断状态以及MEF的状态
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' S, Y8 A: I6 d0 N- b2 V) N从这些照片看, 3天的克隆中,照片1和2中的克隆还行,但是作为3天时候的, 克隆太大了, 这样长到5天后克隆容易分化, 建议传代时克隆再小些. 照片3中的克隆焦距没对准, 不能判断; 照片4种的克隆中间已经有分化迹象, 建议可以用机械法把中间隆起发黄的部分挑除.
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5天的克隆中, 照片1和3的克隆已经出现分化, 照片2的焦距不是很准, 目测有部分也开始分化了,但大部分还是未分化的, 如果出现这种状况, 应去除分化部分,尽快传代.
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不能判断MEF的状态好坏, 不过MEF的密度可以稍微再高点.# H; `# d- r- `& {& z) }& x

) L9 i: y5 V3 Z  z1 W4 j4 G  S建议把整个培养体系和过程发上来分析

stonelee2050

细胞状态不好啊，貌似是分化了。加大MEF量，培养基里加上青霉素链霉素。

是鸟就要去飞

你的细胞太差了，边缘性都没有了，而且分化了。建议你好好看看论坛里别人发的养干细胞的方法

rongrong

感觉MEF的密度有点低，干细胞的边界还算清晰，但中间有空洞，可能是克隆太大的原因

nculsa747

增大MEF密度,问题即可解决！

cony

已分化

花开次第

MEF的单层密度有些稀，一般来说小鼠ES的单层密度80%才好。人的ES单层密度要求更高。而且细胞的克隆太大就会有分化的迹向，要及时传代才好！