WB条带丑陋，求鉴定，求指点，煮样不充分orDNA粘稠？

zhenhua

回复 7ubo 的帖子9 F3 S1 ~& x# S: W( X5 j( X, s  Y6 m
$ W$ I) G" ^6 M, J7 v0 ]
20ul足够。/ ?. h0 ?0 ~  J0 P' m6 p# A7 e
煮20-30分钟不会使蛋白降解。3 _/ `; Y! L, W" u& x
不用离心去沉淀。煮完几乎没有沉淀了。
4 E1 I+ q8 c8 e2 Q: I) x* n可以用actin等高丰度蛋白试试效果。
. x2 m7 m6 \4 `- {

lifangamanda

Zhenhua版主，煮样温度，温度？？？谢谢！

wenyangapple

回复 7ubo 的帖子- _3 r3 C9 {) l$ `9 {4 g  |

: v' b) F3 I- U7 o右侧是好的结果吧？左侧比较糟糕的data最大的可能性没有裂解开，从上面那些黑色的渣滓量比较的大但是下面条带却很细能看出来。裂解buffer的问题可能是pH不对，或者是SDS or NP-40之类的加的不对。

wenyangapple

回复 hndxws 的帖子& D7 j5 c) g1 X1 r
( m, U, v  j! o
我觉得你这个是蛋白没有提出来，或者提出来的蛋白降解的比较严重。

pheebs

zhenhua 发表于 2011-6-13 21:25
6 l& d% p9 W4 ^# P( u/ {呵呵，怎么能说自己的data很丑陋呢？
7 r3 f) ~7 a0 e, |) o; r( F6cm的293T用200ul loading buffer裂解。那你每个泳道上了多少ul呢？  q9 a5 D" i4 \6 u0 A
...

* B- A7 h* d5 E8 b3 P) _8 l
煮这么久，第一次听说。。。

细胞海洋

回复 lifangamanda 的帖子
! z4 S1 |# r1 `
5 z% C! ]- C* f6 H0 q点击Zhenhua版回复帖中的回复按钮发言 像我这样 否则他不一定会看到

chb611301

我觉得先检查一下配的胶，是不是SDS和Aps的问提，胶凝的情况。其次是样品处理一般都是煮样15vmin，都没有问题了。我们常规经验脱脂牛奶封闭要2小时会比较好一些。二抗稀释浓度一般都是1:5000，到1:8000都可以的。

7ubo

回复 wenyangapple 的帖子) u/ L; `* a% {: l2 h# s
0 B9 {4 o& S: X; k# u
长满的6cm的皿的293T用200ul的SDS loading buffer裂解的，是不是加少了？

7ubo

回复 chb611301 的帖子8 g5 H4 y9 b  z- d% f4 _

7 H5 \$ w8 `, e( }- r$ bAPS少加点是不是比较好？

lifangamanda

回复 细胞海洋 的帖子- ?: [2 U0 \5 D
9 ^7 s, r, F0 K
多谢海洋哥！