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always_wp

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楼主

发表于 2011-6-22 11:08 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

呃，在向ES中转染个目的基因，随后进行移植，可是现在要用G418进行压力筛选，高手们给我点建议吧，谢谢啊

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沙发

发表于 2011-6-22 12:55 |只看该作者

我上传了一个protocal，你看一下有没有用。, n1 T1 n E8 c( o
一般转染后要先确定G418的筛选浓度，然后挑选单克隆就可以。

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always_wp

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藤椅

发表于 2011-6-22 23:19 |只看该作者

回复 lili_19840516 的帖子. [1 q7 {; M1 J! S2 ]' \& X4 F

谢谢啦，我先看看啊

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sdjjfangfang

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发表于 2011-6-23 08:38 |只看该作者

转染之前要先筛选G418的作用浓度。设置浓度梯度，大概7天左右的时间，如果让正常的ES全部死亡的浓度，应该是你筛选的合适浓度。筛选的时候要考虑一下MEF的耐受程度哦。我们之前是在feeder free上进行筛选的。

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always_wp

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报纸

发表于 2011-6-23 10:13 |只看该作者

回复 sdjjfangfang 的帖子
8 _' |1 b f9 v6 _( K
哇呀呀，又见feeder freed~！2 h% J) R0 W3 g, G4 L* j
那筛选的浓度范围是在多大的浓度范围内进行筛选的呢，必须要从100-1000ug/ml之内，每间隔100来筛选么。* g4 m n Y' y! G' d
谢谢啊

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sdjjfangfang

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地板

发表于 2011-6-25 10:13 |只看该作者

回复 always_wp 的帖子
* O3 m; R4 K2 Z( v1 v5 Q
呵呵，说在feeder free上进行筛选是为了防止MEF对于G418耐受差，以免出现ES还没有筛出来，但是MEF已经支持不住的情况。关于浓度范围，你可以查阅一下文献，看看用G418筛选时，大家用的都是什么浓度。