求原因。PCR怎么会多跑出一个条带？有图......

jun8013

下次做个对照，不加模板，就知道了，你这个应该就是引物二聚体，二聚体大小一般在这附近

殆死悲爱

不会是引物二聚体，引物二聚体是最前沿那条带，图中有，只是很淡

zhangyan813

看你上面的帖子，你这个应该是做的RT-PCR, 你图上这5个泳道是不同的离子浓度吗？
. U3 B9 c" T4 ]" R* ]建议你做如下实验：1.，下次做PCR的时候建议你在做样品的同时，加一个水对照，就是样品组加DNA, 对照组不加DNA, 用H2O代替，这样就能知道是不是污染了。电泳结果显示如果水对照组没有条带，则进行下面的2；如果水对照组有条带，则说明你做PCR的时候污染了其他DNA，找到污染源，重新做。2. 如果对照组没有条带，而样品组在不同的离子浓度下还出现了这么亮的非特异性杂带，那应该是你的引物设计有问题，建议重新设计一对引物试试。

pla269

正常有三条带5s、18s、28s，28s为18s的2倍左右，你的图不好说建议在跑一次

langziforever

首先楼主的问题就不对，这绝对不是多跑出一条带，而是你PCR扩增的问题，另外，你应该是217bp的长度吧？写错了，呵呵！+ E/ t7 H, \9 U
另外看你8楼地回复，貌似你做的RT-PCR，如果是这样的话，有多条带也比较正常，毕竟mRNA可能存在多种形式的剪切或者不同转录起始位点，
7 v- `  w# p& C建议你优化下引物，或者尝试nest-PCR！

langziforever

回复 jun8013 的帖子% }2 g0 ?0 b5 |7 F* u# n
5 T; j2 f7 q! Y4 B: Z8 z% `
这绝对不会是引物二聚体！

zxcv12345

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, D* M! v8 B% Q7 x3 h  v
" q# l& g/ J4 J: d* s, _+ L- s1. 不会是引物二聚体，分子量有点大
2 P3 A+ A# o1 h. j2.应该用blast检测一下引物的特异性， 很可能是引物不特异。

zxcv12345

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6 d" z- [. m3 J% L1 s! |+ F- M; G9 b4 s" i3 t: ]$ n9 N9 c8 c
1. 不会是引物二聚体，分子量有点大* x- R- F( q% E4 B7 ?- ]9 C
2.应该用blast检测一下引物的特异性， 很可能是引物不特异。

熊猫猫

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' K4 A7 u: K8 ^0 l: H" Y4 F8 r1 M( U
您好，谢谢您和大家的帮助5 u" d: I3 W5 i* Y
这是我第一次跑RT-PCR，所以这张图上五个泳道的浓度是一样的，只是PCR时的退火温度不一样。: E, ^" `6 }( s6 `
以前跑过RT-PCR的师兄也觉得是DNA污染，因为引物比对的特异性还是很好的。今天重新RT和PCR了，退火温度设置得要高一些，还是有杂带，只是没上次得亮和明显了。
1 L3 H8 q+ [8 g& t; ^( G下次就按照你的步骤试试哈，但会不会是在提取RNA的时候就被DNA污染了呢？如果这样的话，有没有办法检测RNA中被DNA污染了？

daviddow

估计是引物设计的原因。可以P出来不同的基因