求原因。PCR怎么会多跑出一个条带？有图......

jun8013

下次做个对照，不加模板，就知道了，你这个应该就是引物二聚体，二聚体大小一般在这附近

殆死悲爱

不会是引物二聚体，引物二聚体是最前沿那条带，图中有，只是很淡

zhangyan813

看你上面的帖子，你这个应该是做的RT-PCR, 你图上这5个泳道是不同的离子浓度吗？& Q  a, p2 W8 x
建议你做如下实验：1.，下次做PCR的时候建议你在做样品的同时，加一个水对照，就是样品组加DNA, 对照组不加DNA, 用H2O代替，这样就能知道是不是污染了。电泳结果显示如果水对照组没有条带，则进行下面的2；如果水对照组有条带，则说明你做PCR的时候污染了其他DNA，找到污染源，重新做。2. 如果对照组没有条带，而样品组在不同的离子浓度下还出现了这么亮的非特异性杂带，那应该是你的引物设计有问题，建议重新设计一对引物试试。

pla269

正常有三条带5s、18s、28s，28s为18s的2倍左右，你的图不好说建议在跑一次

langziforever

首先楼主的问题就不对，这绝对不是多跑出一条带，而是你PCR扩增的问题，另外，你应该是217bp的长度吧？写错了，呵呵！; Z4 a* g, @* J3 T1 _# A/ A
另外看你8楼地回复，貌似你做的RT-PCR，如果是这样的话，有多条带也比较正常，毕竟mRNA可能存在多种形式的剪切或者不同转录起始位点，, W% x  I4 t' G8 G/ E
建议你优化下引物，或者尝试nest-PCR！

langziforever

回复 jun8013 的帖子; d7 ]: g" U- y# e! v( w' u
+ p' T% c! t* n9 y
这绝对不会是引物二聚体！

zxcv12345

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' ?8 x2 v$ G( B  W9 w
: e- h5 @/ ], s; z& J1. 不会是引物二聚体，分子量有点大5 o/ T: J4 x" @( o; C- K) ^2 x* C
2.应该用blast检测一下引物的特异性， 很可能是引物不特异。

zxcv12345

回复 熊猫猫 的帖子, }4 O- m+ n+ d0 Y0 j2 w
% M/ f2 z. }& P+ L
1. 不会是引物二聚体，分子量有点大
& p3 Q8 i) u* V9 J9 J2.应该用blast检测一下引物的特异性， 很可能是引物不特异。

熊猫猫

回复 zhangyan813 的帖子
2 o2 Z4 ~/ H! y2 P: d: y  Z1 \3 B! d
7 J) N, t2 c5 F您好，谢谢您和大家的帮助
' U2 q' j% D7 `7 ?+ B, p; i这是我第一次跑RT-PCR，所以这张图上五个泳道的浓度是一样的，只是PCR时的退火温度不一样。6 E! K1 T) [( E! m% ~
以前跑过RT-PCR的师兄也觉得是DNA污染，因为引物比对的特异性还是很好的。今天重新RT和PCR了，退火温度设置得要高一些，还是有杂带，只是没上次得亮和明显了。
3 B' f& \! W1 F& T, s! b& }下次就按照你的步骤试试哈，但会不会是在提取RNA的时候就被DNA污染了呢？如果这样的话，有没有办法检测RNA中被DNA污染了？

daviddow

估计是引物设计的原因。可以P出来不同的基因