为啥iPS培养液体黄的这么快？

dilal

最近养小鼠的iPS细胞，饲养层培养，培养液用的是血清替代物配制（Knockout SR）的培养基（都是iPS细胞专用的），但是传代后不到一天液体就变黄了，换完液后半天再去看，液体又变黄了。镜下看iPS细胞长的也并不是很明显，怀疑跟孵箱有关，换了孵箱养结果一样。( x9 M# ~4 Z  ?; q
一直搞不懂是怎么回事？细胞长得也不是很快，为啥液体老是变黄？请高人指点。

fananran2003

你培养液是不是用的knock-out DMEM F12,, x/ `8 t) v" Z2 D- h. V# N( x8 `1 |$ H6 k

bunny19870512

测下PH？

微微一笑

一、可能是污染。2 r6 e' E2 u9 Y& W8 v7 V
二、培养箱用了多久，最近有没有调校。我们实验室之前一个培养箱就是这种情况，设置5%CO2，显示也是5%CO2，但是工程师后面来测时发现实际CO2是2.8%。7 _5 G6 r: D5 ^. e( F
三、DMEM F12如果没有调过PH，而直接配出来的培养液是偏酸性的。

hygene

1、测/调PH值；
- x% e8 I; T) x6 n2、考虑支原体污染，如果是那就趁早重来吧。

dilal

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7 q4 ^0 x1 s) \$ A2 E
8 F* @( m% h/ A5 f: D- w是Knockout DMEM

dilal

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9 U; P$ ^! i: X- n& E5 K# M: H$ P5 `( z% d( p
测过PH值，7.0

dilal

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3 e  |' R$ ]' {' v9 _不是污染的问题，仅仅是液体变黄，也不浑浊，而且镜下细胞状态不错，没有发现有污染的迹象。

cicadacjk

knock out serum replacement配的培养基在co2中平衡后就是黄色的，你估计加了15%，放一会应该就黄了。

dilal

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; w/ V# O' s: c, O
是的，我们配制的浓度是15%，按照广州生物医药与健康研究所提供的配方配制的，细胞也是在他们那里买的。但是有一点特别怪，我们用这种液体养ESC细胞时（没有饲养层），液体也不变黄，但是养iPS细胞时就变黄。不知道你们有没有出现这种情况，原因在哪里？