基于载体的miRNA抑制剂表达克隆方案

runsong

回复 snokey 的帖子3 l1 v) a3 Z4 q9 w5 z2 \( R" F

! G4 i( L0 |0 C6 Q你说的是这个意思吗？
1 d) ^/ y0 G* X8 H6 O, s" _但我有一点疑问：loop部分一般只有8bp左右，而siRNA发挥作用仅靠这几个bp够不够？! I& l& B0 _% M3 T; a
不过发明这个方法的人的确够牛的，神来之笔啊。

wwwert

我们实验室的实验过很多种
" v7 R8 u0 E# o  j4 w/ n5 L& lTuD是效率最高的3 g" D1 d  x. B) ]6 w) y
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2665227/9 N) G0 k- u( x' T' M$ C7 j+ x: R# ~
载体构建可以直接买oligo anneal, 很方便
' I7 z! z1 l+ g+ o/ T$ i8 v- ?

amosummer

2000多都算贵，那还做什么实验呢

xiangchou812

学习一下！！

snokey

  Y" c2 s& n( v2 h/ ~! c3 s
' M/ `$ \7 J+ v! b
帮你问了，附件里面有篇JBC的文章，实验室的朋友就是按照文章搞的。siRNA还是和一般的一样21nt，只是siRNA的序列尽量覆盖pre-miR的loop上面那几个起泡的碱基。具体的你看文章吧。 Depletion of human microRNA miR-125b.pdf (1.27 MB)

2011-8-2 07:30 上传

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snokey

奇怪了，我没有选择下载附件还要扣包包，为什么会自动要求扣呢？

细胞海洋

回复 snokey 的帖子+ \$ U; t4 m% _' Y0 P) `) Z4 F: ]

- f4 Y5 h/ l7 H1 V  i系统设置的 下载附件扣2个

wolf1978

还有一种方案，文献上已有报道！那就是miRNA eraser!在U6启动子下引入两个miRNA的反向序列，也能起到较好的抑制效果！详见：3 U$ |) ]1 p0 N/ M7 K
MicroRNA-21 Targets Sprouty2 and Promotes Cellular Outgrowths1 [. m( y* Q4 R0 v; ]
Danish Sayed, Shweta Rane, Jacqueline Lypowy, Minzhen He, Ieng-Yi Chen, Himanshu Vashistha, Lin Yan, Ashwani Malhotra, Dorothy Vatner, and Maha Abdellatif( N' i0 {7 i% F
Mol. Biol. Cell, Aug 2008; 19: 3272 - 3282.

茅草无敌

回复 深海寂寞鱼 的帖子
4 I8 m% D' s$ l, \5 p' o4 u6 {, q. L' _  N
我也偷偷下了看看，希望楼主可以也指点一下我！

茅草无敌

我也想学习一下构建！求指点
! r( g1 e$ [0 t6 T7 @