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胚胎干细胞感染效率低 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-7-28 16:53 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
为什么用逆转录病毒感染ESC的效率这么低啊?上次包毒用GFP作control基本没有克隆绿。。。。听说慢病毒的效率要高一些。各位大侠给解释一下原理,谢谢
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沙发
发表于 2011-7-29 08:19 |只看该作者
回复 ningtinglu 的帖子
8 R# \4 \& [6 f/ q. n% G0 R0 f$ T0 H3 {6 x9 E9 A
逆转录病毒转导ES的话,一般会有一个转录沉默现象,所以你的目的基因表达不了。看到有的公司推出MMLV区域突变了的retroviral表达载体,说可以在ES中高表达,但没试过。一般都是用lentivirus或者电转和脂质体的方法。另外慢病毒感染mES需要注意的几点是:
- q, W6 H( f  Y' y& s3 D5 U1、用病毒的话需要高速离心浓缩一下病毒,感染293T测一下病毒滴度,感染mES一般MOI值要高于50.$ \! j8 E3 c6 A) x, d, D% P( N" b
2、启动子不要用CMV的,用EF-1a的会好很多。其他CAG PGK MSCV的都要比CMV的在ES当中启动效率要高。
9 r3 w' q2 ]2 G* h/ I
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藤椅
发表于 2014-6-30 14:39 |只看该作者
回复 christophe 的帖子
8 \1 R  d. Y6 F8 ?8 v2 h5 {  N% w7 k& X, m3 ]
请问关于MMLV区域突变了的retroviral的具体信息,比如全称,公司等。多谢啦
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