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ningtinglu

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楼主

发表于 2011-7-28 16:53 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

为什么用逆转录病毒感染ESC的效率这么低啊？上次包毒用GFP作control基本没有克隆绿。。。。听说慢病毒的效率要高一些。各位大侠给解释一下原理，谢谢

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优秀会员小小研究员积极份子

沙发

发表于 2011-7-29 08:19 |只看该作者

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逆转录病毒转导ES的话，一般会有一个转录沉默现象，所以你的目的基因表达不了。看到有的公司推出MMLV区域突变了的retroviral表达载体，说可以在ES中高表达，但没试过。一般都是用lentivirus或者电转和脂质体的方法。另外慢病毒感染mES需要注意的几点是：
1、用病毒的话需要高速离心浓缩一下病毒，感染293T测一下病毒滴度，感染mES一般MOI值要高于50.$ \! j8 E3 c6 A) x, d, D% P( N" b
2、启动子不要用CMV的，用EF-1a的会好很多。其他CAG PGK MSCV的都要比CMV的在ES当中启动效率要高。