关于细胞消化的相关实验操作

POPOLD

利华

千里草

消化间充质时，个人认为几步比较关键：1 一定用PBS液或生理盐水将取出培养液的平皿再洗一次，去除残留培养基成分，否则会降低胰酶消化效果。2 胰酶浓度，0.25%是最高的，可对半稀释后再用，消化时注意温度，胰酶最后提前在37度预热 3 消化时应在镜下观察，细胞间连接消失时即可弃去胰酶，加入培养基进行吹打。时间太短不容易吹打，太长就过了，影响细胞状态。总之，多实践几次就好了。

echo

个人的经验，胰酶消化时间长点，相对于不断吹打形成很多泡沫而引起的机械损伤，还是要小些的。

huangcong1988

消化时间要视细胞种类，胰酶量等等因素而定，如果细胞是那种贴壁比较紧的，那么消化时间要适当延长，如果细胞贴壁不好，那么消化时间就不要太长，因为胰酶消化时间太长对细胞有损伤，一般情况下消化时间为2~10min，胰酶用量也很关键，一般情况下500~1000微升就行，我养PK细胞，PK细胞比较经得起折腾，我就直接加1毫升，完了消化三分钟，之后再用力吹打，就能使细胞成为单个圆的细胞了，胰酶最好是分装到1.5ml离心管中，大约为0.5~1ml每管就行，用的时候拿一管，其余负20保存

huangcong1988

消化时间要视细胞种类，胰酶量等等因素而定，如果细胞是那种贴壁比较紧的，那么消化时间要适当延长，如果细胞贴壁不好，那么消化时间就不要太长，因为胰酶消化时间太长对细胞有损伤，一般情况下消化时间为2~10min，胰酶用量也很关键，一般情况下500~1000微升就行，我养PK细胞，PK细胞比较经得起折腾，我就直接加1毫升，完了消化三分钟，之后再用力吹打，就能使细胞成为单个圆的细胞了，胰酶最好是分装到1.5ml离心管中，大约为0.5~1ml每管就行，用的时候拿一管，其余负20保存

huangcong1988

FBS的作用应该是能中和胰酶，使之停止消化，还有就是消化完吹打的轻重，个人觉得要视细胞种类而定，如果细胞比较好养，就使劲吹打没问题，如果细胞比较娇贵，那就轻轻吹打

azzyou

消化间充质一般采用现配的0.125%的胰酶，也就是稀释一倍，在显微镜下观察看到细胞连接消失即用10%的血清终止，吹打的时候新手可以找点吹打，老手就可以绕圈吹打，一般看到一层白色的膜状物质下来了以后就基本可以了。最后说一下，这个吹打的时候不要把管尖的培养液打掉，容易产生气泡。

wangfang

我们实验室用胰酶笑消化时不用摇动，只要加入胰酶后放入37度培养箱中放置30s-1min，拿出来中和就可以了。具体时间要看细胞的状态，状态较好的细胞消化时间较短，状态差的细胞消化时间较长，令外也与酶的公司、批次有关，想准确掌握还需要不断摸索！

barley

1，含血清的培养基一定要洗干净& B6 [+ }* d7 W: N: W
2，配制或稀释胰酶无论用什么缓冲液都不能含钙镁离子8 U5 w% [6 T6 i3 W0 N: ^$ J
3，胰酶浓度根据细胞确定，用下限
0 i* R8 r+ B+ t7 q- ?4，胰酶加进去轻轻摇匀覆盖细胞就行，不能提前吹或者拍打，如果细胞成片下来就不能弄散了6 f( k# Q% X3 r' ^
5，刚开始做的时候可以在镜下观察，细胞变性后把瓶子立起来，不和胰酶继续接触，回台子终止
/ ^2 _  O3 D8 c% D3 g+ f2 c6，可以把胰酶吸走，加入培养基吹打分瓶，如果没有信心的话，终止血清用0.25%胰酶的5%就可以，可以直接吹打，但是最好不要吹起很多泡" {" W( x! k. G1 O% N$ ^% R( ^
7，在胰酶浓度够的前提下，如果消化不好可以在37度孵育，上限是半小时
" x3 c. }+ S# O- Q- T9 R8，胰酶要用进口的

举锅

加胰酶消化时只需要其将细胞都铺到就差不多了，量不需要多，但是时间掌握很很重要，长了细胞受到伤害，时间短了消化不完全，若是强行吹打下去将会有很多片状物。我的经验是将瓶立起来若看到瓶上贴壁的细胞开始慢慢的往下掉了就差不多了。另外一旦消化好就应立即终止消化.