铺板时如何才能把细胞铺均匀？？

zzc2211

6孔板混匀比较简单，12、24、48孔板混匀不容易，溶液少，dish周围因表面张力液体较多，细胞也会多。楼主都集中在中央，就是摇匀时涡漩到中央了。我的做法和8楼的一样，建议楼主试一试。

llecstem

我遇到了和楼主一样的问题，学习了

xuyq706

首先应该确定是否是培养箱不平的原因。但楼主是中间细胞较多，应该不是培养箱的问题。我的感觉也是6孔板混匀比较简单，12、24、96孔板混匀不容易，十字摇晃时还应该注意力度，过猛和过轻都会让细胞产生向心力，聚在中间。

令扬展

十字摇匀没有问题。楼主可以试试在桌面上摇匀，另外摇的时候摇保证液体是前后、左右晃动，没有产生涡流。摇匀后运送的过程一定不能倾斜，不然液体恢复的时候一样有涡流会使细胞集中中间某处。

小木梅

有一个问题是，如果种的细胞密度较大的时候，摇晃反倒使细胞间相互黏在一起了，可以试试从板中心向外画圆圈匀速滴加，尽量一样，不用摇晃，显微镜想观察没有问题就直接培养，如果出现不均匀，就用枪头重新吹打

pla269

十字晃动一定要慢一点，如果还不好就再巧四角，这对小板效果好

wangyashuai

我培养细胞好几个月了，24孔板也种了不知道多少次了，有时候中间一团，有时候边缘密集，有时候中间和边缘密，就是没几次匀的。我现在种不同密度细胞，先往孔里加入PBS润湿，在接种细胞悬液前吸去PBS，细胞是和培养基混合之后，靠着侧壁缓缓加入，在全部加完后，进行十字摇匀，前后八下，左右八下，左右摇时是悬空的。可最后的结果是按加入的顺序，，也是细胞密度从大到小的顺序，出现中间密，中间和边缘密，边缘密的情况，就是没有比较匀的。有问题的只有在吸弃PBS时将板倾斜了一下，难道是倾斜又放下后产生涡流使细胞向中间聚集？请大家帮忙分析一下。

荷荷

建议先加适量培养液，再加细胞悬液，之后轻轻的慢慢的贴紧操作台面左右、前后摇动，注意动作一定要轻、慢，否则容易形成涡旋，让细胞聚集在中间，之后可以在显微镜下稍微观察一下。另外最好放在培养箱的中间部分。

细胞海洋

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wangyashuai

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我今天试了一下，先加入0.9ml培养基，再加入0.1ml细胞悬液，加完在镜下看就是中间多，越摇越多。之后我又把细胞和培养基混匀后，沿边缘转着圈加入孔中，看起来比以前好多了，就看明天细胞贴壁后结果如何了。