ips全军覆没，我该怎么办？

rongrong

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还有那你们一般DMSO浓度到底用多大啊？

dilal

人的iPS细胞生长本来就很慢，既然有贴壁的细胞，为何不继续培养培养，看能否长起来。我们前一段时间买回来的miPS细胞也出现了这种情况，幸亏细胞收到后我们冻存了5管。传完代以后细胞大量漂浮，而且成团状，下面也有少量的细胞贴壁，换完液第二天同样出现相似情况。见帖子http://www.stemcell8.cn/thread-44333-1-1.html3 U& ?2 H3 z& |* Z+ L$ |
当时怀疑是饲养层被支原体污染了，所以将细胞全扔了，剩下的冻存细胞一直没敢再养。最近一直在拿mESC摸索合适的培养条件。建议楼主暂时停下来，找到原因了再去养，查查是否有支原体污染或其它污染？

Yedan

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$ e8 ^% D( n$ C
4 X5 _# f+ R* `! Y: |: U! Y0 y您不是说LZ的10%DMSO浓度低了吗，所以我想请问您冻的时候用多少浓度，还有reference是什么。至于DMSO的作用就不用您解释了……

Yedan

回复 rongrong 的帖子; P4 F, G7 i' e# V3 l
/ c. W+ x9 Q1 l$ M1 `
其实一开始我还猜测LZ你养的是小鼠的ips呢……0 y2 y  Q5 j5 K5 Z) r
你养的是人的ips，为什么会是单细胞？我们实验室都是用针划了传代的，不会消化成单细胞的，再说人的干细胞不能像小鼠那样打成单细胞的，养不活的……
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Yedan

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) Y: h0 {5 t: z( j* `5 J$ p
0 T  c. g/ K; w应其龙的2i不是用在mES的Feeder-free的culture吗，在复苏的时候有用吗？求reference

张也行

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$ K/ c- h6 P2 a# L5 t
& `" q: f9 ?/ V7 P* O. a) ]我觉得是因为你复苏时吹打太剧烈造成的。你是高手，应该明白人的ES和iPS传代时都是传的小集落而不是单细胞，吹打的过于剧烈，小集落不容易生存，更何况是复苏的时候呢。
3 }7 D" L! B8 \/ S( B2 k! C/ e. k* V* P( P
很奇怪你怎么知道贴壁的是单细胞呢？人的ES或iPS细胞单细胞应该很难成活吧，应该是几个细胞形成的小集落吧。

rongrong

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5 ?1 I2 j. O; V$ s6 @# h7 [6 I) c, m7 h; r' _0 z; Y
:'(我是用胶原酶消化的，然后复苏时要洗几遍，不断吹洗，离心，反正就成那了，我也不知道，没有吹很多次的

rongrong

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9 M) G" ~  S. F8 W( F
# R" @1 \  Q$ T; Z8 j8 L& r恩，算是几个细胞的小集落，但是边缘没有那么明显的界限，估计都不行了，我现在想起要养干细胞手都抖，不知道怎么来呵护它，他就会好好的。。。唉1

张也行

回复 rongrong 的帖子  D+ ^( c. ?5 u  S9 o
4 o$ U+ @, z4 Q8 b. N9 r4 _/ T
做实验本来就是这样的嘛，没必要这么灰心。先不要扔掉，再等一两天，如果没有污染，说不定还是会长出来呢。

cicadacjk

回复 Yedan 的帖子. a) B( J) I" s! B5 f. Z

( d6 v( Y! N; W9 |8 [  l这位同志，你对DMSO那位版友反问来反问去也就算了，明显DMSO就是用10%的
* [7 H, ]3 S& O/ ?对jefferson就没必要这样了吧0 I% Y; m, t. ?  ~
Y27632是ROCK抑制剂，可以使人胚胎干细胞可以单细胞传代，能够把0.1%的复苏存活率提高到10%，我自己观察没这么多，但效果还是非常明显的。
9 O$ ?/ H+ n: O2 ?# G2 M至于Qilong Ying的2i是指MEK抑制剂pd0325901和GSK3抑制剂Chir99021，是完全不一样的东西。
4 [% L4 H5 v, k  s
, U; t! K$ Z* X5 h) Y1 s按照WiCell的复苏方式，根本不需要离心，他们认为残留的DMSO对细胞的危害，还没有吹打和离心的危害大。如果的确需要离心，一次也就够了，晃一晃就可以了，除了吹起沉淀那下不要吹打。