ips冻存和复苏可导致全军覆没的因素

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求教，冻存了3批，已经复苏2批了，存活率为0，应该注意什么问题啊？ 实验室仅有的细胞啊

scienese

慢冻速溶   不要搞成单细胞试试  冻小得克隆

andylee824

有两个问题需要注意：一是冻存液是否符合标准；二是冻存时的操作，我冻时都是用冻存盒，负80放过夜后而后转液氮，复苏时要快速的拿出于37摄氏度水浴中，待到有少量冰块时拿出。

hallok

说具体点，别人才好帮你分析吧

sunny2829

去年我也冻存了ips，之后复苏，没一个活的~~~
/ a  n% U$ J. A慢冻速溶，所有操作都符合标准。5 T) a' Z3 {! P" ^7 L; \0 {  ^* m
克隆冻存，10%DMSO,FBS。冻存盒4℃，30min左右，-80℃过夜，第二天转至液氮罐。
/ A) O! [4 i* u# }, G1 |3 A1 n复苏，拿出至37℃水浴锅，管中仍有小团冰块事拿出，用稀释到ES培养基中，800rpm，2min，重悬至MMC-MEF的dish中。6 ?# e) H7 S2 m0 r4 `
反正克隆就是不贴壁~~~# C; M2 |9 w! L0 i3 v
我们实验室另外一位博士，一位硕士就重复过了，结果ips的复苏效率还是0~~~* `+ _$ m  i5 |2 A, [0 O
! a, |3 X4 ?8 m! ?( G. J) k
不过据说ES克隆的复苏效率本来就不是很高~~~

zhusealin

ES的复苏率一般是千分之一，据说复苏完两个星期后才可见克隆长出

zhusealin

还有要注意的是，冻存的时候，冻存液要缓缓加入，复苏的时候，冻存管里的液体也要缓缓加入有培养基的离心管中，边加边晃，为了防止渗透压变化太快

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zhusealin 发表于 2011-9-15 07:35 - c2 p" X* o( Z
ES的复苏率一般是千分之一，据说复苏完两个星期后才可见克隆长出

$ r9 }( \: ?' K1 R
两个星期？？？？？？？

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回复 sunny2829 的帖子
/ `; b( g* A4 s+ S% P* r- t: p. h( x/ J5 v$ s# z7 S
后来呢？有没有解决，复苏后你们观察了多长时间，楼下战友说两个星期啊，我观察5天 发现没有就认为失败了

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回复 andylee824 的帖子: `8 x& _$ E  f  R8 n0 N
% y9 V8 A  p4 w9 F  M
这个快速的概念到底有多快，因为我们液氮灌和水浴锅隔着一个房间，我拿出冻存管，跑到另一个屋，几十秒都过去了，这影响吗？