ips冻存和复苏可导致全军覆没的因素

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9 u( b5 h7 A$ f7 B4 w/ P  w: c冻存液什么标准？多谢

andylee824

冻存液，就是常规的10%的DMSO和90%的FBS,另外需要注意的是：加DMSO时，要逐滴慢加，滴要小，在离心管中的FBS也要慢晃，使其充分混匀。

wangshumin12311

iPS冻存复苏的确是个难办的问题，，冻存尽量要保持细胞不要太小太散，，大块大团的iPS复苏后容易贴壁增殖，还有细胞尽可能多，可以尝试一块六孔板冻2-3支，冻存时细胞状态要良好。复苏后避免枪头反复吹打细胞将细胞吹散，，离心去上清后用钝头巴士吸管吸到包被matrigel的板（或者feeder上），可以多放点培养基，，不去动他，第三天再在显微镜下观察，，，

inno

andylee824 发表于 2011-9-15 13:24 : D* r- v- c" o( r, y
冻存液，就是常规的10%的DMSO和90%的FBS,另外需要注意的是：加DMSO时，要逐滴慢加，滴要小，在离心管中的FB ...

9 ]# W$ j/ t' V- i+ O2 Y: S6 o) H
直接用抢混匀就可以了，这个问题不大的，用冻存液重悬的时候，如果团块较小，可以不用吹打，如果较大，可以适当轻打几枪。

inno

我复苏一般都要观察7-10天左右，可以不必那么着急丢弃的，有些小团块还是有可能生长起来的。复苏第二天不换液，之后每天坚持换液。

kastanie

可以用烧杯什么的装好37-38度得温水，从液氮中拿出直接放在水中快速复苏。一般这个存活率是比较低，冻的时候多冻一点，一周不见克隆也不要放弃，两周真的有可能的。