大家包装的慢病毒滴度是多少（不包括浓缩）

ying

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按这样说来，确实是被稀释了。6 E' Q! m* ?; Y7 |3 ]  L& _0 g  `
不过，通常我是这样认为的:" e. s! P2 f; V0 A5 J
一开始没浓缩时，假设体积是100毫升，
1 m+ K2 y2 C' P浓缩后，变成一个坨坨，
1 f+ H: n/ {; s/ t+ L4 l把这个坨坨用1毫升的溶液给溶解了，6 [) K  A$ y: ^% ?, Y  X$ ^
假设病毒没有损失率，那么就算是“浓缩”了100倍。因此用我的观点看，是“浓缩”了。

ying

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& ~8 a* m: [+ C7 z: s* M+ L, c. [) I, l- [2 E! Q
转染三质粒的时候，我们实验室的protocol是不加双抗的，据说双抗会影响我们的体系的转染效率。原因我也不知道。之后十二小时后我们认为质粒已经进到细胞里面了，所以再加上双抗防止污染。

salomemao

回复 ying 的帖子& ~9 o7 G7 P( F0 j: o0 _/ l
$ j' T" z6 r+ K3 ^8 @
你们平时养细胞的时候都是加双抗的吗？

ying

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) D. ?/ v$ q7 C9 x4 l2 M7 h
: ^  q& p) b0 N  W' L# V. a是啊，让你见笑了 ：）

huangcong1988

) f# Z; @4 q" x  p2 B# a

  n/ J- \% V2 Y! e回复 ying 的帖子
$ p9 Y$ A$ b- o& Y0 n$ A: U
' p( F, u+ q# x( `/ J# J; E0 |100ml？这个离心起来怕是比较麻烦，您是在10ml（或者15买了，亦或者50ml）管里面一次一次离心弃上清么？一般来说，我们是直接15ml上清液（于50ml离心管中）离心，估计最后那剩下的一坨坨大概150ul，这算是浓缩了一百倍，然后再加1ml左右培养液，所以觉得最终只是浓缩了10几倍

ying

回复 huangcong1988 的帖子5 n2 w6 o' v6 z) _1 Y
2 P; ^/ }' f6 W% j* {4 \
我是用50毫升离心管，PEG6000和浓NaCl来浓缩，低速离心。一次可以离35ml，最后溶在400微升里面，扣除损失，估计浓缩应该在80倍左右。我还用超速离心法浓缩过，那个方法得到的坨坨很少，因为坨坨主要是血清里的蛋白，超离的时候很少下来。超离我是37毫升最后可以溶在大概200微升甚至更少。

salomemao

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6 o$ A' F/ P4 H6 P: t9 Z! C$ _& E: q# Q4 J
谢谢你的细心讲解，以后我们可以相互学习

ying

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sunyuzhu10

学习了，我总是包装不好，也是英俊的系统，不怎么看到荧光，大家说英俊的PLP1 PLP2 VSVG怎么样啊

huangcong1988

回复 ying 的帖子- h8 _3 J, X1 U: g) {
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我也是用低速离心来浓缩，不过我用的是PEG8000，50ml离心管，一般我是5mlPEG8000母液，然后加15ml病毒上清，然后离心。你一次离35ml上清液，那你不是包毒的时候要转好几个大皿么？工作量确实够大的。还有，你这个浓缩后的滴度我保守估计能到10的九次方左右，直接用？