大家包装的慢病毒滴度是多少（不包括浓缩）

ying

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/ }) k) A( n9 j  `) j
按这样说来，确实是被稀释了。: ~8 E# s% D8 |, N$ o# r: [* B
不过，通常我是这样认为的:
0 {( z- G4 b5 m9 M0 {8 z一开始没浓缩时，假设体积是100毫升，
2 P) B. d* |/ t  \  B浓缩后，变成一个坨坨，- u* l* d- e, B( c. ]5 y
把这个坨坨用1毫升的溶液给溶解了，
% w: k1 D9 k% D. g# @+ E假设病毒没有损失率，那么就算是“浓缩”了100倍。因此用我的观点看，是“浓缩”了。

ying

回复 salomemao 的帖子! x+ q; T5 G: X- B) \4 j% i  d5 a

& O5 {# w: t5 \; R9 k: V" j  N: j转染三质粒的时候，我们实验室的protocol是不加双抗的，据说双抗会影响我们的体系的转染效率。原因我也不知道。之后十二小时后我们认为质粒已经进到细胞里面了，所以再加上双抗防止污染。

salomemao

回复 ying 的帖子7 e0 |2 Z6 c  y, D0 a, j' g' P7 P
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你们平时养细胞的时候都是加双抗的吗？

ying

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4 S7 g" e6 n9 c# {2 U2 i5 d6 \: c' o/ f( M7 A
是啊，让你见笑了 ：）

huangcong1988

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2 L/ {1 h2 i! h5 t回复 ying 的帖子/ X: i3 T- }: y% |" e
5 k7 {1 [# A1 D) Y) `5 ?! v
100ml？这个离心起来怕是比较麻烦，您是在10ml（或者15买了，亦或者50ml）管里面一次一次离心弃上清么？一般来说，我们是直接15ml上清液（于50ml离心管中）离心，估计最后那剩下的一坨坨大概150ul，这算是浓缩了一百倍，然后再加1ml左右培养液，所以觉得最终只是浓缩了10几倍

ying

回复 huangcong1988 的帖子9 M; m5 u" [  S9 ?; e& l/ R: ]9 }

8 Z; P7 Q; N, p# j我是用50毫升离心管，PEG6000和浓NaCl来浓缩，低速离心。一次可以离35ml，最后溶在400微升里面，扣除损失，估计浓缩应该在80倍左右。我还用超速离心法浓缩过，那个方法得到的坨坨很少，因为坨坨主要是血清里的蛋白，超离的时候很少下来。超离我是37毫升最后可以溶在大概200微升甚至更少。

salomemao

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* M2 L2 l2 R1 e0 r谢谢你的细心讲解，以后我们可以相互学习

ying

回复 salomemao 的帖子9 d4 o1 \$ K9 ?) ^
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sunyuzhu10

学习了，我总是包装不好，也是英俊的系统，不怎么看到荧光，大家说英俊的PLP1 PLP2 VSVG怎么样啊

huangcong1988

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4 \( a" I, n- U  r) g" }" F+ x/ h: ~, t" Y$ {$ W- ?# x# K$ u" f* _/ w( H6 v) A
我也是用低速离心来浓缩，不过我用的是PEG8000，50ml离心管，一般我是5mlPEG8000母液，然后加15ml病毒上清，然后离心。你一次离35ml上清液，那你不是包毒的时候要转好几个大皿么？工作量确实够大的。还有，你这个浓缩后的滴度我保守估计能到10的九次方左右，直接用？