大家包装的慢病毒滴度是多少（不包括浓缩）

ying

回复 huangcong1988 的帖子" p& @* }$ Q3 Q7 |" T
+ C" m5 @7 ]& w( M# c8 T" M  W
按这样说来，确实是被稀释了。
4 T/ O0 o/ `# j3 Q不过，通常我是这样认为的:
4 O6 d3 _  V5 |" A2 _, ]一开始没浓缩时，假设体积是100毫升，
. a, S* k% |7 u9 W/ y4 g) m浓缩后，变成一个坨坨，
# y4 W1 O1 M$ H3 L把这个坨坨用1毫升的溶液给溶解了，! ~' C* O3 @/ j& o; i+ _* Y8 I
假设病毒没有损失率，那么就算是“浓缩”了100倍。因此用我的观点看，是“浓缩”了。

ying

回复 salomemao 的帖子
( x! E" t( y' t3 Z
* q# h/ \& n0 _1 s* q( l1 @转染三质粒的时候，我们实验室的protocol是不加双抗的，据说双抗会影响我们的体系的转染效率。原因我也不知道。之后十二小时后我们认为质粒已经进到细胞里面了，所以再加上双抗防止污染。

salomemao

回复 ying 的帖子. b2 e' y' ?( n( }5 }( S; d, I

0 _! X1 c1 {2 ]! D6 e& P你们平时养细胞的时候都是加双抗的吗？

ying

回复 salomemao 的帖子* O' t7 D. i% `3 ]

1 Q5 X4 m( k: I! E5 x" s+ U是啊，让你见笑了 ：）

huangcong1988

' C7 {- [9 z3 N$ ?$ c2 D3 G" D" H2 r7 M: c
回复 ying 的帖子
  \5 j( ?$ A6 F0 b; n3 J" v) I, B' S, f' v# b) h* M9 s# m  ~4 W
100ml？这个离心起来怕是比较麻烦，您是在10ml（或者15买了，亦或者50ml）管里面一次一次离心弃上清么？一般来说，我们是直接15ml上清液（于50ml离心管中）离心，估计最后那剩下的一坨坨大概150ul，这算是浓缩了一百倍，然后再加1ml左右培养液，所以觉得最终只是浓缩了10几倍

ying

回复 huangcong1988 的帖子; b4 D1 A+ [0 ^  s! c0 r

/ y7 N5 F. e; [1 }9 h- T( R我是用50毫升离心管，PEG6000和浓NaCl来浓缩，低速离心。一次可以离35ml，最后溶在400微升里面，扣除损失，估计浓缩应该在80倍左右。我还用超速离心法浓缩过，那个方法得到的坨坨很少，因为坨坨主要是血清里的蛋白，超离的时候很少下来。超离我是37毫升最后可以溶在大概200微升甚至更少。

salomemao

回复 ying 的帖子/ r1 F* E9 G# D$ ^

9 M; o$ k4 x: _2 U9 Y& A* O谢谢你的细心讲解，以后我们可以相互学习

ying

回复 salomemao 的帖子" k  z4 ~" ?" s' m( M
% R6 a7 y  F5 X8 g

sunyuzhu10

学习了，我总是包装不好，也是英俊的系统，不怎么看到荧光，大家说英俊的PLP1 PLP2 VSVG怎么样啊

huangcong1988

回复 ying 的帖子1 {% D* [# |4 S# u4 r

5 o! A$ P3 J# E& @我也是用低速离心来浓缩，不过我用的是PEG8000，50ml离心管，一般我是5mlPEG8000母液，然后加15ml病毒上清，然后离心。你一次离35ml上清液，那你不是包毒的时候要转好几个大皿么？工作量确实够大的。还有，你这个浓缩后的滴度我保守估计能到10的九次方左右，直接用？