最近要转染乳腺上皮细胞，听说不好转，大家有没有好的建议。

军医

实验室用电转和FUGENE HD转的效率都不高，现在我想用脂质体2000和磷酸钙发转，效率不知道会不会有所提高，大家交流一下经验吧，谢谢了。

shylook

原代？

shuixiao

如果是转染原代细胞的话  还是用病毒载体的转染效率高。目前比较常用的病毒载体系统：腺病毒，慢病毒等。
. i$ [* ^- v' ?- u病毒载体的转染效率还与操作者的熟练程度、经验有关，如果实验室没有相应的转染技术的话，可以寻求一下合作，或者送到其他具有成熟技术的实验室做，当然是在经费允许的前提下。

刘森泉

原代的比较困难，可以要个或买个病毒包装系统试试，也可以先用LIP2000试试，不过估计比较难。

军医

回复 shuixiao 的帖子/ H# ]* E9 E; K, T
6 j) q+ _! G; {* Y# T0 y
我们转的是3代的乳腺上皮细胞，而且还是解冻的，目前我们用的比较多的是电转和FUGENE HD,效率不高

军医

回复 shylook 的帖子3 S# `+ ~4 u8 w# @' N
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原代比其他代数的难转吗？

trl137

我们一般做乳腺细胞的转染，都用的是脂质体介导的转染，效率不错，你可以试试。
$ A4 t2 P# u& ~9 d2 m+ s关于楼上的说转染原代细胞的问题，我想对转染很通的人而言，是不会用原代细胞的，因为本身原代细胞就是从组织块游离出细胞，细胞整体性状不一致，而且还有组织块在其中，所以当把一个外源基因整合到细胞中时，细胞的重编程机制会启动，这需要细胞的状态很好才可以应对这改变。% w% C1 s. _  O; e
但是细胞的传代次数应该控制在4代以内，以维持细胞的最佳状态。% q' }5 N2 U! `! J- `& p+ k
建议用lipo2000，效果很好。

军医

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, L6 r  \- c6 N+ ~( d+ l好的，谢谢，我用200试试

wagumaxida

shuixiao 发表于 2011-11-1 16:40
! a+ l9 K; f  H& \- \" o如果是转染原代细胞的话  还是用病毒载体的转染效率高。目前比较常用的病毒载体系统：腺病毒，慢病毒等。$ u! t! b1 |! T& H/ _+ t7 c- J/ {
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没错 我用的F35型腺病毒，效果很好，另外 学长说腺相关病毒也不错 你可以试试