成年小鼠成纤维细胞培养

超级小葵

新手。现在在做成年小鼠尾尖的成纤维细胞培养，今天是第8天，剪碎后用15%FBS的DMEM培养基培养，到第4天的时候长出来这些东西，跟文献网络上描述的成纤维细胞形态不一样，想请教高手看一下，这是什么细胞！非常感谢。

yanjie11678

应该不是细胞，成体组织块培养细胞应该不会这么快迁出。看你照的照片这些东西和组织块好像不在一个面上啊。

超级小葵

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' U2 g* a1 i8 B/ c: s# p4 N: N: W
" M2 b; f  v" n& V错了，这图是第六天照的，如果这不是细胞，那是什么呢？为什么说组织和细胞不在一个面上，组织本来剪的不是很小

jhu132llh

1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题% I  Y1 t: g: C6 e2 F
2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3天左右将会生长到汇合度50-70%，尤其是组织块周围将会及其密集。8 b3 @, Q+ f! |( v1 |
3.组织培养在培养前期（前2天）请小心少动，过多移动组织皿将影响组织块的贴壁，组织块的贴壁情况直接影响细胞游离生长。

song58

话说怎么感觉有点点像keratinocyte ...

yanjie11678

其它组织块周围也有这样的东西吗？是不是你照相时调焦距的问题？我看组织块的边缘很模糊，怀疑这些东西不在细胞层面上。

超级小葵

jhu132llh 发表于 2011-11-16 16:59
5 v1 J' `4 u/ h0 [! I1.细胞形态不对，请确定焦距没问题，有点疑似对焦不在细胞层面的问题
  b  N0 k" ^; H* w- J2.成纤维细胞将会在3天内大量游离，3 ...

+ l6 B& N6 ~7 b9 w* U1 M我的培养方法应该没问题吧
! O6 g. A# h9 L; g) t( l0 |小鼠尾尖，剪碎后，在培养箱放半个小时左右，让其贴壁，然后加入培养基（15%FBS+DMEM+1%双抗）, G" A; `% a' p/ Y
我每天都拿出来观察，组织贴壁不是太牢

超级小葵

回复 yanjie11678 的帖子. _/ B6 C! W* _$ t& A; J- t6 n3 i! u: z4 b' w

( B, _4 b! ^& R1 v" b/ v难道不是因为组织块比较大的原因吗？

超级小葵

:'(生气啊

jhu132llh

回复 超级小葵 的帖子: Y$ e9 H) T! F

4 \2 ?/ H; v) W2 T& P' w" }掏老窝子技巧，个人尝试好多方法后总结出来的，你可以试试
5 a$ g% @" t9 n0 {8 n$ @1.可以这样，先加一点培养基，在培养皿中晃一晃让培养液均匀铺在皿底，然后加入组织块，培养
5 @9 n" H1 `3 x8 a" c2.6-8小时后沿边缘极其缓慢加入剩余培养液
: G6 O0 l5 ~; f( R! v3 t9 S6 v3.2天不动它0 q+ L( p$ o, [* p
4.这个是总我结了很久的较难培养的组织培养的组织培养技巧，大部分的难培养的组织培养都高效，希望对你有效