干细胞标记及追踪（专题讨论）

千里草

学习了 谢谢

cneagle66

用于人的标记有么？sry应该可以用于人细胞治疗后的检测，别的似乎都有风险吧？

maomaoma

好的资料，谢谢！

namulow

有文献报道说：In SPIO labeled and unlabeled cells, Gene expression levels were comaparable to unlabeled controls in adipogenic and chondrogenic conditions however not in the osteogenic condition. 好像SPIO标记的话对成骨细胞会有不良影响。

namulow

Y染色体sry基因原位杂交操作步骤：
3 W3 ]5 P" \8 M; F0 A4 N一、PCR合成大鼠Y染色体特异性cDNA探针4 G# C- k  w6 y$ |% q& q& K
1、  把107个细胞接种到400μl TNE缓冲液中（10mmol/L Tris、Ph7.9; 10mmol/L NaCl；10mmol/L ethylenediaminetetra-acetic acid），与400μl 20% 十二烷基磺酸钠和40μl 蛋白酶K（20mg/ml）混合。悬液涡旋混匀，37℃孵育12－15h。6 N, {& D) L  E+ u( x, w& e1 Z
2、  DNA用苯酚提取，乙醇沉淀，TE溶解（1mmol/L Tris、ph7.9; 0.1 mmol/L of ethylenediaminetetra-acetic acid）。8 W+ H0 n0 q8 l2 @/ w. ]
3、引物序列设计如下：5' primer, 5'-AGATCTTGATTTTTAGTGTTC-3' and 3' primer, 5'-TGCAGCTCTACTCCAGTCTTG-3'。反应混合物包括1μg基因组DNA、引物各1μm、200μm三磷酸二核苷酸、1×PCR buffer，和2单位Taq聚合酶，终体积为100μl。进行30次扩增，每个循环包括94℃变性1min、50℃退火1min、72℃扩增2min。30次循环后，再在72℃附加扩增7min。PCR产物0.8%琼脂糖凝胶电泳分离，溴乙锭染色检测片断大小，然后纯化准备杂交。
1 E; z, C4 U- T; S3 Q0 b二、原位杂交# [3 z( v0 d. G/ g/ F7 Y
1、  切片去蜡，二甲苯水化，过梯度酒精，然后用蛋白酶K（100μg/ml）37℃消化15min。
& c) A+ i& s, t7 ?6 l2、  前面制备好的Y染色体cDNA探针用地高辛标记检测试剂盒做标记。7 u; K# A; M& O$ F- s7 V+ H
3、  杂交液在42℃过夜。用荧光抗体增强试剂盒（Boehringer Mannheim）可以在荧光显微镜下观察到地高辛标记的Y染色体，由异硫氰酸盐荧光素发绿色光。然后载玻片用10ng/ml亚丙基碘化物（Propidium Iodide，红色）复染，以使细胞核染色，加抗退色液和盖玻片。阴性对照不加探针或抗地高辛抗体，其它按相同操作。
2 h3 b; A1 D% }1 ?% o
8 T  h) }- c' F: m6 ?5 r: J* f* y

大笨鸟

学习啦

lichen7325

本人实验想看看微血管内皮细胞在损伤中如何参与修复的。遇到如何标记细胞的难题。想请问干细胞之家的高手如何在原位标记微血管内皮细胞，然后在不同时期通过组织切片的方法观察细胞的迁移和转化。谢谢！看到一篇用转基因鼠做实验的文章，但转基因动物费用太高，周期太长。不知有没有相对价格低一点的方法。

细胞海洋

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& j+ _" Q; G0 F& y; w1 C建议你发新帖提问

asa_ok

收了，谢谢！

fengxuechunyang

学习了，谢谢！, r4 z2 H8 S/ q# Q+ G( b