feeder MEF皱缩漂浮 不知何故，求分析

573639471

最近一次取MEF，p0很好，但是传代后细胞皱缩漂浮 不贴壁，用未传代的细胞换液，试过培养基没有问题，消化是0.25%的胰酶消化4min，怀疑是消化过度，换了0.05的胰酶，消化3-4min部分皱缩的时候就震，吹，下来一部分时就传代了，瓶上没下来的继续培养，结果可以，但是接下来一次的传代，方法照旧，仍然皱缩不贴壁。前面传代的灭活后，每天都有部分细胞死亡漂浮，有一瓶从第二天起就皱缩了，慢慢死亡，不知是哪里的原因？

郭小妹

你第一次消化的胰酶浓度和消化时间确实都过了。我们做MEF，一般用0.05%胰酶消化2-3min，MEF对胰酶是很敏感的。灭活后每天都死一小部分应该是正常的，但如果大批死亡就不正常了。我觉得你因该考虑下你的原代MEF纯不纯，夹杂的上皮或神经细胞较多的话，不太好。

w1986725

消化不下来的细胞本身就是有问题的，是因为生长时间过长老化，或者几近凋亡，这样的细胞建议不要用了，培养效果不好

majing217

我觉得你消化的时间有点过长，如果在消化2分钟之后不能把细胞消化下来，证明细胞老化了，所以细胞在船只下一代时，细胞状态当然不好了，无论是生长的速度，还是贴壁的细胞都会有所影响。建议放弃细胞，重新培养。
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znbr044

回复 573639471 的帖子1 {4 M( H3 G6 T
' R9 h  U+ O/ Q8 L
有可能是你交配的雄鼠，年纪大了

song58

MEF每代之间样多长时间呢？要是长过了，也会出现生长不正常的现象吧+ r: T& Z! W, D: X/ y2 i
! g5 q$ u% ~# J# E) \3 E
补充内容 (2011-12-5 15:00):0 Y( ]. ]8 {8 t9 k3 y$ \2 O
养几天一代？刚才写错字了

zheng19791221

1、用未传代的细胞换液，试过培养基没有问题?如果用的还是P0代细胞，是检查不好培养基的，建议用其他细胞检测，确保培养基正常，PH正常。
( o" w6 h$ C$ t. q3 j0 a; s/ S2、是否考虑到培养皿或培养瓶的问题，这些检查都不能用原代细胞检查的。
; Q/ R0 ^' j/ \1 F; a5 V# X8 Z7 p1 S7 y3、胰酶消化时间长一些，一般也不会出现这样的问题，还是考虑细胞培养条件的问题。

zhouxiangya

我们也是用的胰酶原液，没有出现上述问题。我们的经验是细胞长密一点没关系，太稀的话细胞只长个头不增殖，而且状态会越来越差。