大家都是怎么用腺病毒转染干细胞啊

sannia

我的大体步骤是：5 y3 C/ m0 b9 Z" q* }

( u3 ^1 {/ W& m" [6 ^0 y用293X细胞做出病毒5 U6 Z" \' e2 B  |7 N
把病毒溶液直接加到比较小的干细胞克隆上 （2次）( Q! O2 c0 O: K9 N2 [7 Z: n
等细胞长满后，在分细胞，打成较小的克隆) H+ ?8 |3 m# z, Z7 e9 V& B. h
然后用抗生素筛选阳性克隆7 @& R" F' ~, q* b- ]- D  X
& a& ]2 Z& a) g
因为我用的是一个诱导表达系统，当我加入诱导剂后发现只有一小部分（10%）细胞表达了目标基因7 u, Z9 @& d3 O
但是所有的克隆都是抗性筛过的
1 u2 _! C# U) j8 y4 I" g( S2 h$ m1 m! v0 T) j& `. i/ f
所以， 搞不清楚为什么效率很低; R* `' e) Q* M$ \  p! e8 [
8 o4 P3 }" I* D$ P) ]% T
希望高手指点！
" E# @+ `: e& K: ~6 n+ m- g9 x: [4 T1 O: s5 L4 q7 c

lvmanrong

我也想知道，大侠，高手在哪儿啊？

晴斗斗

还没做到这一步，前几步问题就很多

三木一叶

有10％就知足吧，哈哈，我是转进去，一点迹象都没有呢

tlms1991

感觉是腺病毒滴度不够。腺病毒是瞬时转染，我的理解是转进细胞后目的基因不会随细胞传代，所以病毒数量要足。