大家都是怎么用腺病毒转染干细胞啊

sannia

我的大体步骤是：
2 E2 f- K4 u1 ^) k8 Z8 R- v( z$ x4 C8 h9 J
用293X细胞做出病毒
4 e6 j; A) l4 w2 w把病毒溶液直接加到比较小的干细胞克隆上 （2次）$ l% @* z- a0 p' ]
等细胞长满后，在分细胞，打成较小的克隆
1 j7 @5 \$ o, n; ~然后用抗生素筛选阳性克隆
. [. a/ m5 `; k0 N2 G) V% B" x2 Z% H; w9 k0 A/ u  S) M% T* i
因为我用的是一个诱导表达系统，当我加入诱导剂后发现只有一小部分（10%）细胞表达了目标基因
. {1 u1 R* s# w, T# e; ]# F但是所有的克隆都是抗性筛过的1 Z. d. ^$ O' i& h
1 t: h- x  C6 p
所以， 搞不清楚为什么效率很低
; R* F+ l$ L1 F2 @5 H  ?2 x2 O- |
* m! g0 f) c2 C8 s) e5 Q希望高手指点！
/ V! U. O/ @1 w+ k3 W# G+ i( I2 R% e* y7 B  x  I9 v0 t8 c0 s

lvmanrong

我也想知道，大侠，高手在哪儿啊？

晴斗斗

还没做到这一步，前几步问题就很多

三木一叶

有10％就知足吧，哈哈，我是转进去，一点迹象都没有呢

tlms1991

感觉是腺病毒滴度不够。腺病毒是瞬时转染，我的理解是转进细胞后目的基因不会随细胞传代，所以病毒数量要足。