脐带间充质干细胞的贴壁分离方法

xiaolong

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5 z7 p$ y8 G' w# ^) |接种后，组织块有个贴壁的环节，贴壁效果好的，加培养液后，细胞会爬的很好，如果贴壁效果不好，组织块会漂在培养液里，细胞爬的效果很差，怎样能让组织块很好的贴壁？贴壁时间多久再加培养液会好些呢？

单个核细胞

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剥胶的时候，剥下来的华通胶直接放在50ml离心管内，全部剥完后剪碎，剪的过程中如果太黏，可以滴加少量PBS，不要滴太多。贴壁的时候用3ml吸管吸起组织，接种在培养瓶中。T75培养瓶每瓶贴20-25块，在培养箱中放置3-4小时后补加适量完全培养液。若是做的晚，可以第二天早上加液。以后观察的时候动作要轻盈，尽量不要使组织块漂起。7-10天后，会有细胞爬出，可以去掉组织块补加新鲜培养液继续培养，等到局部间充质干细胞密集的时候，可以传代。

xiaolong

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# S6 Z4 Z0 I( n  ^% r$ _; {5 W' T) }" _' v+ H( l1 w/ @: E8 [
谢谢啊！

xiaolong

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8 J9 M$ E$ t1 y9 k# d% f( A( b/ q4 x' o0 x
再问，“在培养箱中放置3-4小时后补加适量完全培养液。若是做的晚，可以第二天早上加液”，如果组织块在培养瓶中贴壁，组织块在培养瓶中裸露的时间太久了，是不是会影响组织细胞的活性？

单个核细胞

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9 @* Q- I# p' [4 e6 _" o4 o
过夜我做过多次，没发现对细胞活性有影响。你也可以这样，刚贴完壁在每个贴壁的组织块上滴加一滴完全培养液，保持湿润就行，放置的目的主要是让组织块贴壁牢固，加入培养液后不至于漂起来。

xiaolong

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再谢谢啦

Demon_CN

酶消化法比贴壁法细胞长的快，生产周期短，但是消化法技术要求高，消化时间掌握比较重要消化过度会伤细胞
6 Y9 T# |% n, |- I) i: O6 c& F操作发杂一点，费用也要贵一点。+ r+ F" Y2 f+ w( z3 _/ P1 ^
贴壁法，比较简单，但是周期长一点，我现在就用大概P1代冻存有10*7个细胞（养5个T75，传代一次）。缺点你懂的周期长。
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xuyang0317

个人觉得，贴壁法很好，速度经济，省钱省力省时，就是培养的时间要长点，爬片时注意不要污染，成功率是100%

xuyang0317

你可以先加5分之一的培养液，第二天再补上，没问题的，我做过！

hyf198675

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* l9 U/ z, m$ J2 v你能不能和我说下你们的实验步骤啊？我正在做酶消化法培养间充干，但培养效果不好，拜托了！