细胞中蛋白质提取

冰枫de梦

我用的TRIzol法提取细胞中的RNA,加氯仿离心后分层，RNA主要溶解在水相中，那么蛋白质是不是溶解在有机相中，怎么提取有机相中的蛋白质？求高手指点

rain2402

你是想一次提取又得RNA又得蛋白嘛？       这样提取RNA时的蛋白是变性之后的，很可能发生了剪切作用，一般没有用的了吧？

xbqian

楼上的说得有理，要想核酸和蛋白一起提取，好像难度蛮大的。要是谁能搞定倒是一个蛮大的突破奥。

冰枫de梦

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8 T( F- m) Z& |3 ~# l8 K
  ^# v0 t1 M& J$ d0 X# f2 T哦，这个样子啊，受教了，呵呵

mayansen1314

偶也有过这样的想法呢，不过没试。那trizol法能把DNA跟RNA一起提了么？

mayansen1314

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" b" G: A+ o2 M9 q3 y
5 x# z' W2 C1 w( [. Q; T偶也有过这样的想法呢，不过没试。那trizol法能把DNA跟RNA一起提了么？

冰枫de梦

回复 mayansen1314 的帖子6 P  }  h# o. G$ P! ~" m( S4 v% y
  \6 V* V, X9 S4 F$ t5 x# _$ J
请问你的细胞中蛋白如何提取的，有详细步骤吗，谢谢了

绿雪

细胞总蛋白的就很简单了，加裂解液裂解细胞就可以了；如果是膜蛋白、胞浆或者核蛋白的话，也有专门的试剂盒可以购买。

冰枫de梦

回复 mayansen1314 的帖子6 W( r: ]' |; U

3 C7 Q) T8 E; E9 j不太清楚，看资料说加氯仿离心后分三层：RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）

LQAI2012

回复 mayansen1314 的帖子" M* q; ~' F- f( h7 {

6 P/ ^2 w  p! a  a2 p9 ~) n用trizo提取，DNA和RNA只是分离在不同的液面层上了，应该是可以分开吸取出来，然后再用不同的溶剂沉淀就可以的~/ Q  s) c0 L1 X; r, C
RNA在上层的水相层中，吸取后用异丙醇沉淀
& N4 H1 M0 Q: N  a2 j6 p) _) ]DNA在中间层和黄色有机相层中，用乙醇沉淀