qRT-PCR结果分析

safflower

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" z% W! g% N2 ~
; ?( `3 F+ n' i9 r" @多谢提醒！

huangcong1988

回复 safflower 的帖子6 A2 s6 d7 R% ]4 d! ]

8 P( q- j* C5 C" O: `- R0 ~稳定性？其实随机误差肯定是有的，只要总体趋势一致的话，有小的误差是可以 接受的，尽量加样的时候仔细一点，混匀充分一点，然后多做重复，减小误差

lingchen04

本人也做过不少qPCR，个人觉得，上样误差对结果会有一定的影响

holywater

我两个同样加样孔ct值都差距在+/-0.05以内，楼上的那些现象根本不存在的
  {3 X1 l) ]1 R& W# |; c1 {% S! o. @* c" H
原因有好多： 1.请确保每次CDNA量都一致，样品间一致，每次实验一致9 ~" M# D9 {7 x0 _% o3 Y% T
              2，请把MIX吸出并暖到常温，或者把枪头冷到0度，保持温度一致. c* S, {2 M; Q% F
              3，请自己设计引物，不要轻信文献的引物& L* c4 _( n$ C! H
              4，也是最重要的，你们没加roxII,----至于ROXII是什么，怎么，还要我挨个告诉你不成，自己去看说明书  E7 l" ^$ E9 S8 X) w: n
/ ^* Z* j- S0 d( n) G7 P/ v
             我这帖子要求至少20威望2 @+ W/ j$ H3 L. G8 Z, F  H6 y. a9 j

; M. j  D# R6 @% g0 S. Q  g9 e
, H2 g4 k. }7 X" \! f8 k' P

细胞海洋

回复 holywater 的帖子" j7 N- z! B# B! G0 t
, F, D6 N/ p; h
不带这样的2 C3 V) p, L9 ~9 n
" y- h" e7 V* V# ]' P
多参与几次讨论 不就升上去了嘛

holywater

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8 x1 g- F* [) s9 K% }% y$ W
4 |! P4 d# R$ q# e) h" g哈哈，抱歉。讨论也分数量和质量的嘛
- @, j  ^$ Y6 y6 D0 {
7 f4 V6 u% l6 U好多人误差非常大，就是因为没仔细看说明书，或者某些小厂家为了节约成本% K$ u& D* r6 c

5 e3 v1 h4 S3 a! C, G5 T" A* m. C* l根本没有给你ROXII,ROX校正试剂; L2 s$ }$ o) q5 s

& {5 T( B2 s7 j6 E& d  Y4 M这是好多人感觉误差大的根本问题，加了ROXII后曲线整整齐齐的。
/ L' c) _- ~  j9 K
; Q" f2 A* t2 P

holywater

以前没加ROXII时候做六个一模一样的孔，误差甚至到+/- 0.5 CT7 b+ H( p+ p: C# C" v
: S, {) }) E+ a7 Z) f  L+ L* A
加了之后误差只有 +/- 0.05

safflower

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) t! G3 ?9 X+ [0 c( }+ X
6 l: [: w) Z0 H( s9 R% T, r' H- ?1 C谢谢！, f# \  H$ |* O9 P- ?3 F
我们就根本没有ROX校正试剂。看来以后要找试剂商要了。

sj03572001

商业的Q-pcr Mix试剂一般都分为含ROX和不含ROX的，可以根据需要选择MIX，3个复孔的平行重复一般CT值差异很小，但是同样的模板同样的条件再重复几次的话，往往结果差异就比较大了，所以不能只做一次，根据3个复孔的结果计算标准误，这样的结果是不可信的！

mansnoopy

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/ G7 I6 F4 c8 [( c% |! Y+ _3 O$ ?" q
我建议你还是重复实验吧。如果还不行就重新抽提RNA