qRT-PCR结果分析

ophden

多做几次吧，反正做一次也说明不了问题

frankieisme

回复 huangcong1988 的帖子# x: t& J* y2 u+ F6 b- e6 n! `* O
5 K7 [, u) D  X$ V
每次不一样是可以理解的,只要deltaCt值是恒定的旧可以,因为你每次做的时候阈值定义不一定是一样的,最终mRNA的相对量也是根据deltaCt值来确定的.

frankieisme

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  H$ ?! D! R- i- Q' I9 M" F6 f' M
这个变化是可以理解的,但只要deltaCt值相对稳定就可以.RealtimePCR的重复性应该是很高的.

huangcong1988

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8 s0 p9 C) e: D" S: Q9 T; a; Y9 Y* W* }7 k& N9 \3 O
这个delta Ct值是怎么算的？是拿什么减什么？那个Cp值又是怎么回事？可以直接用吗？

huangcong1988

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/ n3 s1 t$ W8 p! x6 J/ C* X" b5 E1 X* \  g% R# R$ y) n/ k2 T% g. B( H
如果是绝对定量呢？绝对定量不需要内参，咋办？

2010liao

定量的结果应该可靠些，

nankou2008

我记得在不同时间做的样品 板间还要设几个孔板间的矫正的 好像是ROX？
1 V* X: c1 q3 l% K2 V. E# mqPCR结果是精密的 也就决定了在做的时候 任何一个小的地方的误差都能导致最终结果的差异
+ o' a6 b3 z* I8 U* S上样时模版量 引物量等等都会有影响 相信这也是qPCR结果难以重复的重要原因( b+ y+ g$ V; k8 G) P
另外我觉得还是qPCR结果可信点 因为这个过程实时记录扩增过程 看扩增曲线就能看出
. L: y- J) H( q/ {9 {3 f电泳结果只是体外扩增的最后结果 相信产物量达到一定阈值的时候就不太看的出差异了2 R7 u; Y& i+ h1 G
况且电泳也只是个粗放的检测方式

c05241037

模板浓度确定一样么》？一样的条件下CT值不会有差别才对，我之前做的就很稳定

张莹莹

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2 J6 S* A! G  C' A
7 y. z- x  s0 `  L/ e3 A# r  o& f# G您好，看到你的回复说做的Qrt-pcr用的绝对定量方法，我老师也让我用这种方法，但是具体的还不太清楚，就是如何才能绝对定量呢？

huangcong1988

回复 张莹莹 的帖子& M2 A, c/ l4 h: N1 s% ~9 F

: G8 d% ]. y* J5 k; s: c定量基因的拷贝数