qRT-PCR结果分析

ophden

多做几次吧，反正做一次也说明不了问题

frankieisme

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& j3 D% ], ~: H1 F
5 v- G, `- p$ j6 `( |每次不一样是可以理解的,只要deltaCt值是恒定的旧可以,因为你每次做的时候阈值定义不一定是一样的,最终mRNA的相对量也是根据deltaCt值来确定的.

frankieisme

回复 zdgrp 的帖子) H" [' P% O$ s. s. ]5 c
$ R+ ^: P# O9 ?5 ~2 M2 s% X, C2 i
这个变化是可以理解的,但只要deltaCt值相对稳定就可以.RealtimePCR的重复性应该是很高的.

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子& X1 f+ o2 v4 U+ u

" {" f' P2 {5 o# K这个delta Ct值是怎么算的？是拿什么减什么？那个Cp值又是怎么回事？可以直接用吗？

huangcong1988

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& i: e. M. S2 t
3 m' D2 o* F: v1 H3 R5 _4 `9 E: Z如果是绝对定量呢？绝对定量不需要内参，咋办？

2010liao

定量的结果应该可靠些，

nankou2008

我记得在不同时间做的样品 板间还要设几个孔板间的矫正的 好像是ROX？6 w9 }( j2 V) a+ O. g) k
qPCR结果是精密的 也就决定了在做的时候 任何一个小的地方的误差都能导致最终结果的差异3 d" _' r) v, G" J
上样时模版量 引物量等等都会有影响 相信这也是qPCR结果难以重复的重要原因
1 A- _/ ?( ]( {7 `另外我觉得还是qPCR结果可信点 因为这个过程实时记录扩增过程 看扩增曲线就能看出
* @- f7 Z/ ~% N3 x" s电泳结果只是体外扩增的最后结果 相信产物量达到一定阈值的时候就不太看的出差异了( v0 Z! F- N- d
况且电泳也只是个粗放的检测方式

c05241037

模板浓度确定一样么》？一样的条件下CT值不会有差别才对，我之前做的就很稳定

张莹莹

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- [6 G. q: V; o
$ @8 P7 t: |0 J9 q( i  a. S! y您好，看到你的回复说做的Qrt-pcr用的绝对定量方法，我老师也让我用这种方法，但是具体的还不太清楚，就是如何才能绝对定量呢？

huangcong1988

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$ _( k3 X% x% F1 a( o+ O0 v( R. q2 d/ H2 X- A4 z+ h
定量基因的拷贝数