qRT-PCR结果分析

safflower

" Y" G$ ~/ V) O' X
最近在做realtime PCR，结果分析显示目的基因表达下调，溶解曲线等参数都挺好的。再将PCR产物拿去跑电泳，条带显示相反结果，非常明显。很纠结，不知该相信哪个？为什么二者不一致？2 C% g5 q; e# H; s0 v

' X/ c  N3 |- J7 k* E7 P请高手指点。多谢！

小松鼠s

纠结啊

jessewill

相信QPCR的结果吧，DNA电泳那么粗放，再确认一下吧

sj03572001

Q-pcr结果重复性不好，不稳定，这也可算是Q-PCR的一个缺点吧，我去年做了近1年的Q-PCR，同样的实验条件，重复好几次，每次的结果都不一样，结果差距很大，搞的人很郁闷，不知道该以那次结果为准

huangcong1988

对，绝对不能相信跑胶的结果，定量结果还是更准确一些

huangcong1988

回复 sj03572001 的帖子
; B+ ~/ M! p* q( ]  C# o# @0 N7 Y4 s3 R  s$ e  y, a' B
是啊，我做了好多次了，每次结果都不一样（我做的是绝对定量），虽然不同浓度Ct值总体趋势一样，但是同一浓度Ct值差别很大（同样的体系，同样的条件），做几次几次结果不一样，很纠结，他们说是加样误差什么的，我也不确定

zdgrp

我去年也做了很多RT-PCR，不同次的重复结果还是很consistent的，是不是机器的原因啊，其他人做也差很大吗？

safflower

对啊，今天做的结果跟昨天做的结果也不一样，Ct值均在35以下，溶解曲线也挺好，为什么变化趋势不一致？该怎么改进呢？

细胞海洋

回复 safflower 的帖子" E0 R! \% c, i5 Y
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safflower

回复 huangcong1988 的帖子# j3 k' [$ ^. N) o% R7 d
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谢谢！荧光定量PCR作为目前最先进的检测基因转录水平的表达情况，确实应该是较普通PCR准确一些，但问题是如何保证荧光定量PCR结果的稳定性，操作的可重复性？