qRT-PCR结果分析

ophden

多做几次吧，反正做一次也说明不了问题

frankieisme

回复 huangcong1988 的帖子6 f. x! p6 h0 L' S: ?/ `; W
6 ?. R/ B, H/ ?- _' ?: W3 L
每次不一样是可以理解的,只要deltaCt值是恒定的旧可以,因为你每次做的时候阈值定义不一定是一样的,最终mRNA的相对量也是根据deltaCt值来确定的.

frankieisme

回复 zdgrp 的帖子
  c/ g2 H5 j) l* M
9 T0 q0 ]$ [4 k9 e! b这个变化是可以理解的,但只要deltaCt值相对稳定就可以.RealtimePCR的重复性应该是很高的.

huangcong1988

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: a2 _; J. \0 G. o
$ o$ x$ [! w& r! r5 @这个delta Ct值是怎么算的？是拿什么减什么？那个Cp值又是怎么回事？可以直接用吗？

huangcong1988

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  P$ q4 G3 [% V$ s9 r7 N$ z
" P( t( e' ~& m! {! U6 y3 a% H如果是绝对定量呢？绝对定量不需要内参，咋办？

2010liao

定量的结果应该可靠些，

nankou2008

我记得在不同时间做的样品 板间还要设几个孔板间的矫正的 好像是ROX？; d6 A$ ]# o2 C
qPCR结果是精密的 也就决定了在做的时候 任何一个小的地方的误差都能导致最终结果的差异
( ]; b% ~4 N, f8 w' B" J' p3 [上样时模版量 引物量等等都会有影响 相信这也是qPCR结果难以重复的重要原因
+ l2 C# u8 G! b" ]; i另外我觉得还是qPCR结果可信点 因为这个过程实时记录扩增过程 看扩增曲线就能看出# I- k. d. M. a# d
电泳结果只是体外扩增的最后结果 相信产物量达到一定阈值的时候就不太看的出差异了4 N$ w& C7 s4 G7 K! p/ s1 e
况且电泳也只是个粗放的检测方式

c05241037

模板浓度确定一样么》？一样的条件下CT值不会有差别才对，我之前做的就很稳定

张莹莹

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8 H5 i) j7 b7 _5 M# V7 q* b/ ?9 T3 `
. q: T3 h" E0 s. x" ]7 b* I) i7 ~# b您好，看到你的回复说做的Qrt-pcr用的绝对定量方法，我老师也让我用这种方法，但是具体的还不太清楚，就是如何才能绝对定量呢？

huangcong1988

回复 张莹莹 的帖子1 o" Y$ W2 Q' x. F. O2 g

% M& [  O; P1 x4 ?0 \定量基因的拷贝数