qRT-PCR结果分析

ophden

多做几次吧，反正做一次也说明不了问题

frankieisme

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. r. d% c6 D2 `" s1 Y* w& w% S. g3 s- T6 d5 K# D
每次不一样是可以理解的,只要deltaCt值是恒定的旧可以,因为你每次做的时候阈值定义不一定是一样的,最终mRNA的相对量也是根据deltaCt值来确定的.

frankieisme

回复 zdgrp 的帖子
5 i1 C9 v- |$ J: v; Q; z8 b  o. d9 ~% `+ \' d( n
这个变化是可以理解的,但只要deltaCt值相对稳定就可以.RealtimePCR的重复性应该是很高的.

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子. U% D2 G" Q2 P) v6 L5 _2 I
% m) s% C% X" K7 |! ]# H" r
这个delta Ct值是怎么算的？是拿什么减什么？那个Cp值又是怎么回事？可以直接用吗？

huangcong1988

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- N7 U( O3 H- v8 T7 f
% l8 b( z3 Y% [4 X# u如果是绝对定量呢？绝对定量不需要内参，咋办？

2010liao

定量的结果应该可靠些，

nankou2008

我记得在不同时间做的样品 板间还要设几个孔板间的矫正的 好像是ROX？
" Q/ o  s% M2 v" G: W3 O( w- [qPCR结果是精密的 也就决定了在做的时候 任何一个小的地方的误差都能导致最终结果的差异1 T. Z, t* _2 g% D; Z  q1 v2 J2 @
上样时模版量 引物量等等都会有影响 相信这也是qPCR结果难以重复的重要原因+ H3 ]3 X6 w  M# U# o1 b* A2 Q  W
另外我觉得还是qPCR结果可信点 因为这个过程实时记录扩增过程 看扩增曲线就能看出, u* x) F- P6 V5 W5 z% ?
电泳结果只是体外扩增的最后结果 相信产物量达到一定阈值的时候就不太看的出差异了# a3 b" C1 h- |' U8 V, W
况且电泳也只是个粗放的检测方式

c05241037

模板浓度确定一样么》？一样的条件下CT值不会有差别才对，我之前做的就很稳定

张莹莹

回复 huangcong1988 的帖子) j7 L3 Q! ^. ?# y

. X8 D8 c2 d4 Z7 I! k您好，看到你的回复说做的Qrt-pcr用的绝对定量方法，我老师也让我用这种方法，但是具体的还不太清楚，就是如何才能绝对定量呢？

huangcong1988

回复 张莹莹 的帖子; e; y0 {$ u$ s7 x6 L
5 |$ v) U2 X5 y, S$ ^' R
定量基因的拷贝数