关于胰酶消化细胞

zdgrp

回复 xiongjiedeng 的帖子
6 F& s+ S6 j8 [* @' j$ V& `5 O! Y7 [$ X% V+ d
谢谢！我用的是六孔板，300ul，你说的2ml是用来消化多大的皿/孔？

zdgrp

回复 safflower 的帖子
/ X$ Q3 R) N$ K2 o' m1 T" ~5 e5 c
谢谢！刚接触细胞培养，感觉手法对于细胞的状态有很大的影响，确实需要用心摸索！

zdgrp

回复 wuyannini 的帖子  _' q8 x2 R5 H

: v/ i- k2 E/ l) I- V嗯，我都是用PBS（六孔板每孔1ml的量）洗一遍，应该有这方面的原因，谢谢！

zdgrp

回复 mirrida 的帖子% Q1 C8 m# ~/ s" `$ l1 s% s+ g! H
. d. V: g: p8 K& e
谢谢！但过消化是不是对于细胞状态有不好的影响？

zdgrp

回复 yyshpy 的帖子/ |9 g) h! Y+ Y2 T

0 H5 E2 U, q3 t0 z% ~1 i" F% X谢谢！加消化液一般多长时间，可以在镜下看到你说的那种细胞状况？？

yyshpy

回复 zdgrp 的帖子
& G% {5 n  H9 m. m" R$ C/ Z0 J
3 G: [: ]6 [8 K; q* `* G, U+ j消化液用量尽量少，能轻轻覆盖到细胞就行，消化时间嘛，与细胞属性密切相关，一般1~2min，就可以了

yyshpy

回复 zdgrp 的帖子
- L9 h% A+ H! w5 M/ K0 O! v, b1 F' R  E
消化液用量尽量少，能轻轻覆盖到细胞就行，消化时间嘛，与细胞属性密切相关，一般1~2min，就可以了

xiongjiedeng

回复 zdgrp 的帖子8 Y/ q; P( F1 z4 z' P

( i7 ?9 c% V4 p7 C7 A呵呵~我用的是10cm培养皿，那就不用那么多，用个400ul足够了

wangfang

1先将胰酶放在37度中温热 ，因为胰酶最适作用温度是37度。- u0 k! M7 ~5 u# i2 {# s0 S
2然后将培养皿内的培养液吸出
1 A3 ^# y4 Y4 B* r+ c* Z8 |% A3用DOBS清洗，我们只清洗一遍
6 u) ~* D9 y! Z4加入胰酶，只有完全覆盖住皿底就可以了
& ]; W/ b  I* R( k5放回37度培养箱中，待细胞大部分变圆时轻轻的敲打培养皿使细胞飘起来
4 i1 H$ X& U) F3 ~* P6加入终止液，离心即可。
6 ]* y4 F- h; w, Q# q. K" J7这里面最重要的步骤就是消化时间的掌握和敲打培养皿的力度

receiver1

如果你感觉胰酶消化的太厉害，可能你的胰酶活力很强，可以把胰酶稀释一下再消化。我就是稀释的，根据自己的需要摸索一下浓度。我用的是0.15%的胰酶