关于胰酶消化细胞

zdgrp

最近养小鼠ES细胞，每次传代时用0.25%的胰酶消化，胰酶从4°冰箱拿出来后没有37℃预热，在超净台放到室温。感觉有时候消化的太厉害（超过3分钟），有时加培养液终止、吹匀的时候又有些贴壁没消化下来的，请教一下应该如何把握消化的时间？谢谢！

lingminliang

胰酶的消化能力并不是一定的，不同的批次对不同的细胞的消化能力也不同，而且新配置的酶的消化能力较强，随着使用时间的延长，消化能力就降低。

xiongjiedeng

从4℃出来要在37℃预热半个小时，效果会好很多；然后得看你的细胞了，不同的细胞对胰酶的反应不一样，还有细胞的密度也有关系，所以楼主要慢慢摸索，总结经验。我一般是用2ml的胰酶，消化2—3min足够了

safflower

以下几点可能需要注意：8 m9 p( H% w5 J% w) z1 y
1.一定要让胰酶均匀分布在整个培养板/瓶中，可以轻轻晃动使其均匀平铺于整个细胞层面；
- n  j( Y: f$ R8 M; L2.加胰酶后，一定要在显微镜下观察，看到细胞回缩变圆，少许细胞漂起时，立即终止消化。  U3 e5 _/ i: i, ?# t4 D. I
3.吹打制成悬液时要轻柔，尽量不产生气泡，因为气泡破裂时产生的冲击力很大，可将消化后的细胞破碎；  |3 q( l1 M) Z9 S# o7 M" U3 f! [
4.另外吹打的时候每个部位要到位。7 P& l7 X$ }/ r( e) y. b. a0 R

大少爷

显微镜下观察一下嘛

xiaoqi

补充一下：如果你感觉没有消化下来的细胞比较多的话，可以再加少许胰酶作用一下，这样就比较充分了。

wuyannini

我也补充一点，就是在倾去培养基之后，用PBS清洗一定要充分，一般2-3次，如果残留有血清成分则不利于消化。我的经验

yyshpy

给个建议是，加上消化液后，放镜下看，待绝大部分细胞变圆，界限清晰，细胞透明，表面有部分细胞漂浮，这时候就可以终止了，基本适用于所有细胞，

cgc123

最好还是在显微镜下观察，细胞间隙变大，收缩变圆就可以了，不要等到细胞都漂起来。有时候细胞生长的密度什么的都不一样，消化时间也会有些差异，所以还是显微镜下看一看比较好。

mirrida

  没那么复杂吧，这个消化度很难掌握的。我一般会采取两种办法：
3 b* K* E3 t0 G1 p2 _0 @) N$ a/ G  一、让他过消化，然后全部洲际离心再加培养基培养；
4 T: C' X/ b5 p# v9 Q  二、就是大部分消化了还有少许没消化，吸出大部分消化液，留少许，将细胞再静止1-2min,这样既可保证消化完全 ，有保证了不会太损伤细胞。