请教高手：怎么才能做出好的ＥＢ呢？

刘森泉

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好的，谢谢你！

刘森泉

回复 wwy551 的帖子4 w6 M) M+ B& s' G6 p
1 U! E( k( d3 _: w
请教下，养的hES很容易分化，而且一些分化了导致传代之后就有很多分化的，恶性循环了。想用枪头在显微镜下一个一个挑，但是今天试了下，实在不行啊，这么多克隆，很难挑啊。有没有好一点的办法？谢谢。

wwy551

回复 刘森泉 的帖子6 W" s, V5 W+ f. [7 Y6 g6 a# L, S
: S, G! Q3 l5 \- o# M: g4 Z, ~' Z
你这种做法治标不治本，建议重点想办法调整ES状态。) L; o0 D% G. \: V8 b8 W
问题可能出在你用的MEF上。不知道你用的feeder是原代的MEF传到几代做的，建议不要超过三代，而且每次传代的时候比例不要太高。或者你可以适当提高你现在养ES的培养基的bFGF的浓度。总之，不管接下来要做什么，一点得先保证ES的状态很好，不然做下去的话也不会有像样的结果。祝好~~

wwy551

回复 刘森泉 的帖子5 {9 l* P4 @( C/ z+ L
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你这种做法治标不治本，建议重点想办法调整ES状态。( D/ a2 [. f* \8 l2 b' d
问题可能出在你用的MEF上。不知道你用的feeder是原代的MEF传到几代做的，建议不要超过三代，而且每次传代的时候比例不要太高。或者你可以适当提高你现在养ES的培养基的bFGF的浓度。总之，不管接下来要做什么，一点得先保证ES的状态很好，不然做下去的话也不会有像样的结果。祝好~~

刘森泉

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9 c' ?* s# ]/ Z谢谢。我用的是CF-1的MEF，5代之前，ICR的也用过。bFGF用10ng/ml，perotech的，那接下去提高点浓度试试。

wwy551

回复 刘森泉 的帖子6 P) N8 r% H5 L, q3 G# K1 _# M
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你用的bFGF浓度正常，MEF有点过了，别传到5代再用，四代都勉强吧，最好用三代的，这样的MEF状态会比较好，分泌FGF的能力比较强

刘森泉

回复 wwy551 的帖子- ?' k1 q4 |7 v6 g

9 Z0 z8 f5 F3 [4 Z' I你刮细胞使用移液管吗？还是1ml枪头？我昨天用枪头刮了ES和iPS，今天看了下，看不到克隆啊，都是散的细胞了，要么是分化的团块。最近养ES养的头疼，很多次请教你，麻烦了。

wwy551

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3 w/ A% ^9 A; q) d8 B2 h0 E3 H% G# f& J2 P+ A5 e
我们都是用1ml的移液管刮克隆，当然你消化克隆的时间也得足够，看到克隆边缘卷边的时候再刮。刮的时候，移液管垂直培养皿底面。枪头的话对细胞损伤太大，我们从不用来刮克隆。

刘森泉

回复 wwy551 的帖子: `' G: R. e  {$ G# x
7 @: M0 h# L% Y5 w9 ?) z; U$ @/ f& s2 k
分散酶消化后，用移液管在显微镜下一个个刮还是大范围地刮克隆呢，如果没有目标地随机刮的话是不是不用酶消化啦？

wwy551

回复 刘森泉 的帖子; n+ S. r4 p" a; y" y

* X! Q$ G$ [% o# c& V0 m4 a就常规传代ES的做法操作就可以啊，不知道你平时是怎么传代的