求助：培养CIK细胞时候怎么去除红细胞？？？高人解答，谢谢

113305060

我做CIK细胞培养，首先提取外周血单个核细胞，但这里面会混有红细胞，接种到培养瓶中培养，取悬浮细胞继续加生长因子培养，但是取悬浮细胞的时候还是有红细胞在里面悬浮啊，而且以后换液传代都是取悬浮细胞，那么红细胞不是一直都混在里面吗？用红细胞裂解液2次仍然去除不了红细胞，求高人解答，谢谢

evial

离心沉淀细胞团后加入红细胞裂解液，冰上放置5-10分钟，经常震一下，然后加PBS15-20倍体积离心后就能去除，沉淀下来的细胞团是白色的，这就成了。当然裂解液质量也是要考虑的，用流式专用的比较好。

yaolinzhang

提单个核细胞的时候红细胞就沉淀去掉了就

113305060

麻烦再问一下二楼的大神，我用的红细胞裂解液说明书上写再入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，混匀，然后离心，不知道哪种方法对，麻烦您解释一下，谢谢

大少爷

外周血提取单个核细胞的时候，选择合适的分离液，合适的离心参数，多洗涤几次，红细胞就应该去的差不多了
- F/ F6 i5 r, @+ p( _/ i1 l，然后经过十几天的培养，扩增，收集时的洗涤，离心，在洗涤，红细胞会去除的比较干净。
6 B0 S3 x/ V1 [+ K$ j+ O1 r6 b: f$ C( P  N* u7 y4 b
另外，如果培养扩增后的CIK任然有许多红细胞时，也不能用红细胞裂解液裂解，扩增后，由于细胞量
0 H6 Y: _' h9 O2 k3 D* }# R太大，对裂解液的量以及红细胞裂解的时间根本不好把握，而且会对CIK细胞有很大的伤害，造成的后果
: ^# c) \% x; E' d0 a9 j可能很严重，不建议裂解。: x" U8 r# g5 u5 @
: i( `) d% Z- H) K
外周血培养的CIK如果用于临床治疗的话，也只是用于本人，有红细胞也没什么问题。而且即使是脐血培养的，& [4 \' d3 f0 {" M$ H
CIK回輸时一般要求十的九次方以上的细胞量，有少量的红细胞也是是没事的。+ Z/ B: `( x$ E2 [
9 [, Q$ n. O6 b+ Z: H
如果实在是要裂解的话，建议在提取单个核细胞以后裂解，加入细胞体积3-5倍的红细胞裂解液，吹打混匀几十秒，8 j- h9 z+ m5 N: f6 i8 z
待悬液的红色变淡时立即加盐水终止裂解，混匀，然后离心。效果会好点。
% |( l3 z# `3 s; u9 Q6 f* C4 F  \. Z

113305060

好的，谢谢大家的回答，我还有2个问题想问一下，刚刚接触，问题比较多，呵呵2 t  I" I% a; @* F8 R3 i$ ?+ B
1.培养基的使用，我们实验室以前一直使用DMEM培养间充质的，我查文献上面说养PBSC需要用1640培养基，请问用DMEM可以替代吗？两者培养对PBSC影响大吗？& q) V% f* M( M& z) J
2.我前天提的PBSC（外周血单个核细胞），放在直径100mm培养皿里面培养，48H后换液观察发现有一些点状贴壁，请问一下PBSC贴壁是不是也像间充质干细胞一样一开始呈现梭形，谢谢！

evial

一种是直接破红，在血液里加入裂解液，是用于检测，因为要加说明说体积的裂解液。另一种使用分离液提取，这样基本就已经去除红细胞了。不知你用的是哪种。

细胞海洋

回复 113305060 的帖子7 }7 s2 H& l0 B/ _

! O2 a6 ^0 b: h+ P( ]9 y你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样2 \3 |! ]7 y8 U( p
* y' h8 c  S  P# ^5 ^
否则他会看不到5 ^) |6 l! N$ u9 [, V/ c. J0 ?
# C1 t$ x$ p" {, B" A' Z3 b
另外建议重新发个贴子提问 这样问 很少有人能看到

113305060

回复 细胞海洋 的帖子3 z. J% ?, n+ B# O

6 }0 k1 t. p" M1 e好的，谢谢

zuming

关键看做什么用，如果是给病人回输的，混有一点点红细胞是无所谓的，不影响。没必要除掉。