关于跨膜分泌蛋白的融合过表达

runsong

如题，我想将此类蛋白与GFP 融合表达，可以用什么常规载体，构建时有什么原则吗？

风雪叶杰

感觉这种融合表达会产生问题，因为GFP说实话并不小，对蛋白的折叠会有影响，而且融合蛋白过大也会增加分泌的难度吧？个人意见，仅供参考

weiyepan

融合荧光蛋白为什么要分泌出去啊？楼主是想要什么样的实验效果呢？又不是细胞定位。如果只是看表达筛选的话不如用个化学发光的标签，比如Gluc，seAP之类的。! [& E4 n0 @* G8 X6 ~
我们倒是有两个载体是上面两个蛋白双分泌的，就是不知道你做什么用合不合适。
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runsong

回复 weiyepan 的帖子; E8 y4 B$ n2 s  O# z6 F& E

7 s4 ~7 d  w6 K. D* g7 b我要研究的蛋白就是分泌蛋白

weiyepan

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4 U( q. ]6 S) V$ L6 t: S: b" q6 j  B6 b0 J) R) I  \
据我所知分泌蛋白都是有信号肽的，不知道你所做的是野生型分泌的还是要融合信号肽分泌出去。+ G3 ^" E8 g% Q# P" }/ k. t& Q4 j5 o+ L1 U
正如2楼所说的，GFP的结构很强，会影响蛋白折叠的可能性也很大，不止是融合蛋白，就连用IRES表达的GFP，对前后的蛋白表达量都有一定的影响的。如果你只是做几个，那么可以试一下，如果是做screen的话，出入就比较大了，结果不一定可信。