关于跨膜分泌蛋白的融合过表达

runsong

如题，我想将此类蛋白与GFP 融合表达，可以用什么常规载体，构建时有什么原则吗？

风雪叶杰

感觉这种融合表达会产生问题，因为GFP说实话并不小，对蛋白的折叠会有影响，而且融合蛋白过大也会增加分泌的难度吧？个人意见，仅供参考

weiyepan

融合荧光蛋白为什么要分泌出去啊？楼主是想要什么样的实验效果呢？又不是细胞定位。如果只是看表达筛选的话不如用个化学发光的标签，比如Gluc，seAP之类的。
9 ~# [3 j+ z5 H% [1 t2 k我们倒是有两个载体是上面两个蛋白双分泌的，就是不知道你做什么用合不合适。& Q, |- {) R( t  n8 e

runsong

回复 weiyepan 的帖子7 _5 p6 F3 w2 }( b, p$ t9 Z

" m( y# K% Q: F9 v! w3 o我要研究的蛋白就是分泌蛋白

weiyepan

回复 runsong 的帖子6 R. o# ?! O3 {. L: i

, O, @4 {2 \& T  d6 s+ f据我所知分泌蛋白都是有信号肽的，不知道你所做的是野生型分泌的还是要融合信号肽分泌出去。
9 e' V9 u8 c, r( g正如2楼所说的，GFP的结构很强，会影响蛋白折叠的可能性也很大，不止是融合蛋白，就连用IRES表达的GFP，对前后的蛋白表达量都有一定的影响的。如果你只是做几个，那么可以试一下，如果是做screen的话，出入就比较大了，结果不一定可信。