请教大家一个Westren Blot的问题

ind6562

    各位高人，我要检测的蛋白在细胞核与细胞质均有表达，之前用免疫荧光法检测过了，但我导师说还要定量检测才行，所以我现在想用Westren Blot检测它在细胞核与整个细胞的表达情况。请问有人做过类似的实验吗，如何用Westren Blot专门检测核内的蛋白，内参选b-actin可以吗？

liumenghan

你导师不是要你定量检测蛋白吗？用western不好定量吧…用ELISA比较好吧
* B7 P1 |: d; O& I4 D- Q如果一定要WB的话，只能用标准品蛋白设置个梯度，最后只能杂出个大体浓度范围。

ind6562

回复 liumenghan 的帖子$ h( w3 Z- x/ G1 Y
7 {% j8 q, |' P2 r/ r
相对定量就可以了，ELISA不是检测胞外蛋白的吗？

liumenghan

回复 ind6562 的帖子
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8 y" s3 k# E; Y: I* ?% q& J我以前看过一篇做核内binding protein的用的是ELISA。如果只是相对定量的话用不着了
! B* |0 T# P( |/ J  Z: `# B9 X7 [我前段时间检测过胞浆蛋白，用试剂盒，实现胞浆蛋白和细胞核分离，你可以找份说明书看看。5 Y$ w5 o; q8 l: @
我也是新手……希望能对你有点儿帮助。

BenHantun

这样的话是不是分别提取核 和胞质，再从核和胞质中分离蛋白，如果做细胞的话，细胞最好多一些。内参能不能用组蛋白当内参呀，这个我不确定，你在问问别人

ind6562

回复 BenHantun 的帖子3 y$ S/ C. M* g3 J
5 N+ G4 W3 i2 X: [
我刚看了文献，有人用HISTOE H2A作内参，谢谢啦~

wangzhiqi86

western最多也只能算半定量吧

Donnies

核内蛋白，我们一般选tublin的

jl860822

做免疫组化吧，可以很清楚的看出来

naturehu

细胞核的话能够用细胞核蛋白的提取试剂盒。